आरएनए निष्कर्षण तरल आण्विक जीवविज्ञान अभिकर्मक

उत्पाद का परिचय:

यह उत्पाद आरएनए निष्कर्षण समाधान एक अभिकर्मक है जो कोशिकाओं या ऊतकों से कुल आरएनए निष्कर्षण के लिए उपयोग किया जाता है। यह आरएनए को रिलीज करने और इसे फेनोल में निकालने के लिए कोशिकाओं को तेजी से एलवाईएसई करने के लिए गुआनिडाइन इसोथियोसाइनेट और अन्य पदार्थों का उपयोग करता है। साथ ही, इसमें आरएनए अवक्रमण को रोकने और आरएनए अखंडता को बनाए रखने के लिए आरएनएएसई अवरोधक शामिल हैं।

पैकेज सामग्री:

गोदाम की स्थिति:

गीले आइस बैग परिवहन; 4 ℃ तापमान पर संग्रहीत, 12 महीने के लिए मान्य।

उपयोग:

स्व-तैयार एलएफ, आइसोप्रोपोल अल्कोहल, डीईपीसी पानी, 75% इथेनॉल (डीईपीसी जल तैयारी)।

1. एक सेल या ऊतक नमूने का lysis

पालनित कोशिकाएं: सेल संस्कृति माध्यम को हटाएं, पूर्व-ठंडा पीबीएस की उचित मात्रा के साथ स्वच्छ कोशिकाएं, और जितना संभव हो सके पीबीएस को ब्लॉट करें। प्रति 6-अच्छी प्लेट प्रति 6-अच्छी प्लेट और 0.5 मिलीलीटर आरएनए निकालने की राशि के अनुसार अच्छी तरह से प्लेट में आरएनए निकालें और 12 अच्छी तरह से प्लेट के अनुसार, धीरे-धीरे प्लेट के नीचे कोशिकाओं को आरएनए निकालने से संपर्क करने के लिए धीरे-धीरे हिलाएं, कोशिकाओं को lyse बनाने के लिए पिपेट बंदूक के साथ कोशिकाओं को उड़ाएं, फिर अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें, और कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए खड़े हो जाएं।

निलंबित कोशिकाओं: कोशिकाओं को सेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा एकत्रित किया गया था, और सतह पर तैरनेवाला को यथासंभव हटा दिया गया था। 1 मिलीलीटर आरएनए निकालने को प्रत्येक 1-10x106 कोशिकाओं में जोड़ा गया था, और कोशिकाओं को पिपेट गन के साथ कई बार उड़ा दिया गया था, फिर कोशिकाओं को 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर खड़ा किया गया था।

ऊतक नमूना: ऊतक को छोटे टुकड़ों में काट लें और उन्हें पूर्व-ठंडा homogenizer में डाल दें। ऊतक के हर 100 मिलीग्राम के लिए 1 मिलीलीटर आरएनए निकालें और होमोजेनाइज करें जब तक कि कोई ऊतक के टुकड़े दिखाई न दें। ऊतक के टुकड़ों को 10 मिनट के लिए 4 ℃ पर 12000 जी पर सेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा अलग किया गया था, और सतह पर तैरनेवाला को एक नई अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित कर दिया गया था।

2. आरएनए निष्कर्षण: 380UL एलएफ प्रत्येक 1 मिलीलीटर आरएनए निकालने में जोड़ा गया था, और फिर एडी मिश्रण या उल्टा-नीचे 15s के लिए अपकेंद्रित्र ट्यूब हिंसक रूप से हिल गई थी, और कमरे के तापमान पर 3min के लिए छोड़ दिया गया था।

3. सेंट्रीफ्यूगेशन: 15 मिनट के लिए 4 ℃ पर 12000 ग्राम पर अपकेंद्रित्र, ऊपरी रंगहीन जलीय चरण को नई अपकेंद्रित्र ट्यूब में ध्यान से स्थानांतरित करें, और 500-550ul प्रति एमएल निकालने के लिए अवशोषित करें।

4. प्रक्षेपित आरएनए: 550UL आइसोप्रोपोनोल को ऊपर एकत्रित जलीय चरण निकालने वाली ट्यूब में जोड़ा गया था, कई बार कई बार उल्टा मिश्रित किया गया था, और 15min के लिए -20 ℃ पर प्रक्षेपित किया गया था।

5. सेंट्रीफ्यूगेशन: 12000 जी पर 10min के लिए 4 ℃ पर केन्द्रित, सफेद वर्षा ट्यूब के नीचे दिखाई दे रही थी, जो कुल आरएनए थी, और सतह पर तैरनेवाला छोड़ दिया गया था।

6. धोना: 1 मिलीलीटर 75% इथेनॉल जोड़ें और इसे उल्टा मिलाएं। 4000 जी पर 12000 जी पर सेंटीफिगेशन के बाद, सतह पर तैरनेवाला को त्याग दिया गया और फिर थोड़ी सी गति (3-5 के लिए 5000 ग्राम) पर संक्षेप में केंद्रित किया गया। तरल को एक माइक्रो सक्शन हेड के साथ सावधानी से चूसा गया था।

7. आरएनए विघटन: आरएनए वर्षा के साथ अपकेंद्रित्र ट्यूब 3-5min के लिए खुला छोड़ दिया गया था। आरएनए थोड़ा सूखने के बाद, आरएनए को पूरी तरह से भंग करने के लिए 20ul डीईपीसी पानी जोड़ा गया था, जिसका उपयोग एकाग्रता का पता लगाने और अनुवर्ती प्रयोगों के लिए किया जा सकता था। सावधान रहें कि आरएनए को बहुत ज्यादा सूखा न करें, अन्यथा यह विसर्जित करना मुश्किल होगा और ए 260/280 अनुपात को प्रभावित करेगा।

टिप्पणियाँ:

1. सभी विंदुक युक्तियाँ और अपकेंद्रित्र ट्यूब rnase प्रदूषण से मुक्त होंगे। आप हमारी कंपनी से बाँझ एंजाइम मुक्त उपभोग्य सामग्रियों को खरीद सकते हैं।

2. इस अभिकर्मक में Guanidine IsothioSyanate शामिल है और फेनोल को आराम दिया है। त्वचा या इनहेलेशन के संपर्क से बचें।

3. कृपया प्रयोगशाला के कपड़े और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।