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आरएनए संश्लेषण के लिए टी 7 उच्च उपज प्रतिलेखन किट

विशिष्टता: 50 टी
उपलब्धता स्थिति:
  • G3021-50T
  • Servicebio
  • सर्विसबियो

उत्पाद वर्णन

G3021-50T

उत्पाद का परिचय

यह किट एक रैखिक प्लास्मिड डीएनए, एक पीसीआर उत्पाद या सिंथेटिक डीएनए युक्त टी 7 प्रमोटर युक्त टी 7 आरएनए पॉलीमरेज़ का उपयोग कर रहा है, और आरएनए का संश्लेषण विट्रो में लिखित है। यह किट विट्रो ट्रांसक्रिप्शनल प्रतिक्रिया प्रणाली में आरएनए को अनुकूलित करता है, जो आसानी से बड़ी संख्या में आरएनए अणु प्राप्त कर सकता है। यदि संशोधित न्यूक्लियोटाइड सब्सट्रेट में जोड़ा जाता है, तो प्रतिक्रियाशील न्यूक्लियोटाइड तैयार किया जा सकता है, और आरएनए लेबल किया जा सकता है। यह किट मुख्य रूप से इन विट्रो अनुवाद, आरएनएएसई संरक्षण प्रयोग, हाइब्रिड जांच टैग, आरएनए कतरनी और अन्य जैविक प्रयोगों में उपयोग किया जाता है। प्रतिक्रिया प्रणाली में 1 μg का एक टेम्पलेट इनपुट 100 μg से अधिक आरएनए का उत्पादन कर सकता है, जो लंबाई 100-5000 एनटी की आरएनए की तैयारी के लिए उपयुक्त है।

भंडारण और परिवहन

गीले बर्फ के साथ परिवहन; 12 महीने के लिए मान्य -20 डिग्री सेल्सियस पर भंडारण।

कदम

1. टेम्पलेट तैयारी:

ए। टेम्पलेट के रूप में टी 7 प्रमोटर के प्लास्मिड का उपयोग करें: एक विशिष्ट लंबाई के आरएनए प्राप्त करने के लिए, प्लास्मिड टेम्पलेट को पूरी तरह से रैखिक किया जाना चाहिए (इसे टेम्पलेट के रूप में शुद्ध करने की आवश्यकता है), और रैखिक प्लाज्मिड को यह सुनिश्चित करना चाहिए कि डबल स्ट्रैंड्स हैं ब्लंट समाप्त होता है या 5'Overhangs (3'Overhangs दिखाई देने से बचें), प्रत्येक प्रतिक्रिया के लिए अनुशंसित टेम्पलेट राशि 1 μg है;

बी। एक टेम्पलेट के रूप में टी 7 प्रमोटर या संश्लेषित डीएनए टुकड़े के पीसीआर उत्पाद का उपयोग करें: जब पीआरआर टेम्पलेट को बढ़ाता है, तो गैर-कोडिंग स्ट्रैंड प्राइमर के 5'एंड में टी 7 प्रमोटर (5'-taatacgactcactatagggg-3 ') जोड़ें। पीसीआर उत्पादों को शुद्धिकरण के बिना सीधे ट्रांसक्रिप्शन टेम्पलेट्स के रूप में उपयोग किया जा सकता है, लेकिन शुद्धि के बाद अधिक आरएनए का उत्पादन किया जाएगा। प्रत्येक प्रतिक्रिया के लिए अनुशंसित टेम्पलेट राशि लगभग 0.5 μg है।

2. प्रतिलेखन प्रतिक्रिया: तालिका में अनुशंसित प्रतिक्रिया प्रणाली के अनुसार, साफ ईपी ट्यूब में विभिन्न अभिकर्मकों को जोड़ें, अच्छी तरह मिलाएं, और 2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर प्रतिक्रिया करें। (यदि 300 एनटी से कम आरएनए संश्लेषित करते हैं, तो प्रतिक्रिया समय को 4 एच या उससे अधिक समय तक बढ़ाने की सिफारिश की जाती है)।

अवयव

आयतन

टेम्पलेट

0.5-1 μg

5 × टी 7 ट्रांसक्रिप्शन रिएक्शन बफर

4 μl

25 मिमी एनटीपी मिश्रण

2 μl

टी 7 आरएनए प्रतिलेखन एंजाइम मिश्रण

4 μl

Nuclease मुफ्त पानी

20 μl तक

3. प्रतिक्रिया पूरी होने के बाद, सिस्टम में 1 μl Dnase I जोड़ें, और प्रतिबद्ध डीएनए टेम्पलेट को पचाने के लिए 15 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर प्रतिक्रिया करें।

4. इलेक्ट्रोफोरोसिस विश्लेषण और शुद्धिकरण के बाद डाउनस्ट्रीम प्रयोगों में संश्लेषित आरएनए का उपयोग किया जा सकता है।

5. प्रतिलेखन उत्पादों की मात्रा और पहचान: आरएनए की एकाग्रता पराबैंगनी अवशोषण विधि द्वारा निर्धारित की जा सकती है (नि: शुल्क न्यूक्लियोटाइड क्वांटिफिकेशन की सटीकता को प्रभावित करेगा, आरएनए उत्पादों को शुद्ध करने की आवश्यकता है); इलेक्ट्रोफोरोसिस डिटेक्शन को 1% फॉर्मल्डेहाइड एग्रोस का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है जेल का पता लगाने, इलेक्ट्रोफोरोसिस समाधान 1 × मोप्स बफर (10 × मोप्स बफर: 0.4 एम मोप्स, पीएच 7.0, 0.1 एम सोडियम एसीटेट, 10 मिमी ईडीटीए) है। जेल तैयारी विधि: 36 मिलीलीटर rnase-मुक्त पानी में agarose के 0.5 ग्राम वजन, पिघलने के लिए गर्मी, और 5 मिलीलीटर 10 × MOPS बफर जोड़ें। जब समाधान गर्म नहीं होने के लिए ठंडा हो जाता है, तो 9 मिलीलीटर फॉर्मल्डेहाइड समाधान (37%) जोड़ें, अच्छी तरह मिलाएं और गोंद डालें। इलेक्ट्रोफोरोसिस डिटेक्शन के दौरान, आरएनए लोडिंग बफर के साथ आरएनए की उचित मात्रा मिलाएं, 10 मिनट के लिए 70 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं, फिर 2 मिनट के लिए बर्फ स्नान करें, और सभी नमूने स्पॉट करें। इलेक्ट्रोफोरोसिस के बाद, अवलोकन के लिए ईबी या सेकरेट (जी 3606) के साथ दाग।

एहतियात

1. मानव त्वचा की सतह आरएनएएस में समृद्ध है। प्रयोग करते समय कृपया प्रयोगात्मक दस्ताने और मास्क पहनें। प्रायोगिक उपभोग्य सामग्रियों को rnase संदूषण को रोकने के लिए बाँझ और एंजाइम मुक्त हैं।

2. यदि आपको लेबल वाले आरएनए तैयार करने की आवश्यकता है, तो कृपया किट में एनटीपी मिश्रण को प्रतिस्थापित करें।

3. किट में नियंत्रण टेम्पलेट की प्रतिलेखन लंबाई 500 एनटी है।

4. आपकी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के लिए प्रयोगशाला कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

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