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एनेक्सिन वी-आईएफ 488 / पीआई सेल एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट

मात्रा: 50 टी
उपलब्धता स्थिति:
  • G1513-50T
  • Servicebio
  • सर्विसबियो

उत्पाद वर्णन

उत्पाद की जानकारी:

उत्पाद का नाम

बिल्ली। नहीं।

आयतन

एनेक्सिन वी-आईएफ 488 पीआई सेल एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट

G1513-50T

50t

G1513-100T

100 टी

उत्पाद वर्णन:

एपोप्टोसिस एक सामान्य शारीरिक प्रक्रिया है जो भ्रूण विकास और ऊतक होमियोस्टेसिस के रखरखाव की प्रक्रिया में होती है। यह कई morphological परिवर्तनों के साथ है। उनमें से, सेल झिल्ली का नुकसान एपोप्टोसिस की शुरुआती विशेषताओं में से एक है। सामान्य कोशिकाओं में, फॉस्फोटिडाइलेरिन (पीएस) केवल सेल झिल्ली के फॉस्फोलिपिड बिलायर के भीतरी तरफ वितरित किया जाता है, लेकिन एपोप्टोसिस के शुरुआती चरण में, पीएस लिपिड झिल्ली के बाहरी पक्ष से बाहरी पक्ष तक बाहर निकल जाएगा, इसे उजागर करेगा सेल के बाहर। Annexin v (Annexin v) एक Ca2 +-निर्भर फॉस्फोलाइपिड-बाध्यकारी प्रोटीन है जो पीएस के लिए उच्च संबंध के साथ है और विशेष रूप से पीएस के संपर्क में कोशिकाओं को बांधता है। इसलिए, अनुलग्नक वी का उपयोग प्रारंभिक सेल एपोप्टोसिस का पता लगाने के लिए संकेतकों में से एक के रूप में किया जाता है। प्रोपिडियम आयोडाइड (पीआई) एक न्यूक्लिक एसिड डाई है। यह तीव्र कोशिका झिल्ली और प्रारंभिक एपोप्टोटिक कोशिकाओं के साथ सामान्य कोशिकाओं में प्रवेश नहीं कर सकता है, लेकिन देर से एपोप्टोटिक और नेक्रोटिक कोशिकाओं के सेल झिल्ली में प्रवेश कर सकता है और नाभिक दाग सकता है।

यह उत्पाद प्रारंभिक सेल एपोप्टोसिस का पता लगाने के लिए एक पहचान जांच के रूप में ennexin v लेबल वाले IF488 फ्लोरोसेंट डाई अणु का उपयोग करता है। साथ ही, पीआई का उपयोग नेक्रोटिक और देर से एपोप्टोटिक कोशिकाओं से जीवित कोशिकाओं को अलग करने के लिए किया जाता है। जब एनेक्सिन वी-आईएफ 488 पीआई के साथ संयोजन में प्रयोग किया जाता है, जीवित कोशिकाएं नकारात्मक धुंधला दिखाती हैं (अनुलग्नक वी- / पीआई-), प्रारंभिक एपोप्टोटिक कोशिकाएं एकल फ्लोरोसेंस पॉजिटिव (एनेक्सिन वी + / पीआई-) दिखाती हैं, और देर से एपोप्टोटिक कोशिकाओं और नेक्रोटिक कोशिकाएं दोहरी दिखाती हैं प्रतिदीप्ति सकारात्मक (अनुलग्नक वी + / पीआई +)। यह किट प्रवाह साइटोमेट्री या फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप पहचान के लिए उपयुक्त है।

भंडारण और परिवहन

गीले बर्फ में परिवहन; अंधेरे में 2-8 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें, 12 महीने के लिए मान्य।

अवयव:

घटक संख्या

अवयव

G1513-50T

G1513-100T

G1513-1

अनुलग्नक वी-आईएफ 488

250 μl

2 × 250 μl

G1513-2

प्रोपिडियम आयोडाइड (पीआई)

250 μl

2 × 250 μl

G1513-3

1 × बाध्यकारी बफर

25 मिलीलीटर

2 × 25 मिलीलीटर

उत्पाद उपयोगकर्ता पुस्तिका

1 पीसी

ऑपरेशन कदम:

1. निलंबन कोशिकाएं: सेल निलंबन लें, और सेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा 500 ग्राम पर 5 डिग्री सेल्सियस पर 4 डिग्री सेल्सियस पर कोशिकाओं को इकट्ठा करें;

अनुवर्ती कोशिकाएं: पहले सेल संस्कृति सतह पर तैरनेवाला एकत्रित करें। ईडीटीए मुक्त ट्रिप्सिन (जी 4002 अनुशंसित) के साथ पाचन के बाद, सेल संस्कृति सतह पर तैरनेवाला के साथ गठबंधन करें, और 500 ग्राम पर 500 ग्राम पर 500 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा कोशिकाओं को एकत्रित करें। ट्राप्सिन पाचन समय बहुत लंबा नहीं होना चाहिए, ताकि अत्यधिक पाचन से बचें और झूठी सकारात्मक कारण बन सकें।

2. पूर्व-ठंडा पीबीएस (जी 4202 अनुशंसित) के साथ कोशिकाओं को दो बार धोएं, और प्रत्येक बार 500 ग्राम पर 500 ग्राम पर 500 डिग्री सेल्सियस 4 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा कोशिकाओं को एकत्रित करें;

3. धीरे-धीरे पूर्व-ठंडा 1 × बाध्यकारी बफर में कोशिकाओं को पुन: प्रस्तुत करें और सेल एकाग्रता को 1 ~ 5 × 106 / मिलीलीटर समायोजित करें;

4. सेल निलंबन के 100 μl लें, 5 μl annexin v-if488 और 5 μl पीआई जोड़ें, धीरे-धीरे मिश्रण करें, और कमरे के तापमान पर 8-10 मिनट के लिए प्रकाश से रक्षा करें;

5. पूर्व-ठंडा 1 × बाध्यकारी बफर के 400 μl जोड़ें, धीरे-धीरे हिलाएं, और 1 एच के भीतर प्रवाह साइटोमीटर या फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप के साथ पहचान करें।

परिणाम विश्लेषण

1. प्रवाह साइटोमेट्री

ए। उपयुक्त वोल्टेज का चयन करें और प्रवाह साइटोमेट्री पहचान और विश्लेषण के दौरान हल्के मुआवजे को समायोजित करें। प्रयोगात्मक समूह को छोड़कर, और एक-लेबल नियंत्रण (केवल अनुलग्नक वी-आईएफ 488 और केवल पीआई जोड़ें) को समायोजन और मुआवजे के लिए एक एकल-लेबल नियंत्रण (केवल एनेक्सिन वी-आईएफ 488 और केवल पीआई) को समायोजित करने के लिए एक नकारात्मक नियंत्रण (बिना किसी मार्कर) सेट करने की अनुशंसा की जाती है;

बी। प्रवाह साइटोमेट्री पहचान और विश्लेषण के लिए संदर्भ उदाहरण:

जुरकैट टी लिम्फोमा कोशिकाएं 6 एच के लिए 5 माइक्रोन कैम्पटोथेकिन के साथ प्रेरित थीं। उपरोक्त प्रयोगात्मक प्रक्रिया का संदर्भ लें और परिणामों का पता लगाने के लिए प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग करें। परिणाम नीचे दिए गए आंकड़े में दिखाए जाते हैं।

IF488 की अधिकतम उत्तेजना तरंगदैर्ध्य 491 एनएम है और अधिकतम उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 518 एनएम है; पीआई-डीएनए कॉम्प्लेक्स की अधिकतम उत्तेजना तरंगदैर्ध्य 535 एनएम है और अधिकतम उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 615 एनएम है। प्रवाह साइटोमीटर के प्रासंगिक विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके दो फैलाव बिंदु ग्राफ बनाएं, जिसमें abscissa और pi पर ordsissa और pi पर if488 के साथ। एक ठेठ प्रयोग में, जीवित कोशिकाओं में कोई फ्लोरोसेंस नहीं होता है, और बिखरे हुए बिंदु निचले बाएं के पहले चतुर्भुज में होते हैं। शुरुआती चरण में एपोप्टोटिक कोशिकाओं में मजबूत हरी प्रतिदीप्ति होती है, और बिखरे हुए बिंदु निचले दाएं के दूसरे चतुर्भुज में स्थित होते हैं। देर से एपोप्टोटिक कोशिकाएं और नेक्रोटिक कोशिकाएं लाल और हरे रंग के डबल फ्लोरोसेंस दिखाती हैं, और बिखरे हुए बिंदु ऊपरी दाएं के तीसरे चतुर्भुज में स्थित होते हैं।

2. फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप निरीक्षण

ग्लास स्लाइड पर 6 μl अनुलग्नक वी-आईएफ 488 और पीआई डबल-दाग सेल निलंबन जोड़ें, इसे एक कवर ग्लास के साथ कवर करें, और दो रंगीन फ़िल्टर के साथ एक फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप के तहत निरीक्षण करें। एनेक्सिन वी-आईएफ 488 में एक हरा फ्लोरोसेंस सिग्नल है और पीआई लाल फ्लोरोसेंस सिग्नल है।

टिप्पणियाँ:

1. पूरे प्रयोग के दौरान, ऑपरेशन सेल टूटने से बचने के लिए जितना संभव हो सके कोमल होना चाहिए और प्रयोगात्मक परिणामों को प्रभावित करना चाहिए।

2. पीबीएस के साथ कोशिकाओं को धोना नहीं छोड़ा जा सकता है, और साथ ही, जितना संभव हो सके अवशिष्ट पीबीएस को हटा दें।

3. यदि ऑपरेशन के दौरान अग्नाशय का उपयोग किया जाता है, तो सीरम के साथ पाचन को समाप्त करना सुनिश्चित करें और जितना संभव हो सके अवशिष्ट अग्नाशय को हटा दें।

4. अनुवर्ती सेल एपोप्टोसिस उत्तेजित होने के बाद, कुछ कोशिकाएं तैरती हैं, और सेल संस्कृति सतह पर तैरनेवाला में कोशिकाएं एक ही समय में एकत्र की जाएंगी, जिससे परिणाम अधिक सटीक हो जाएगा।

5. एपोप्टोसिस एक सतत और गतिशील प्रक्रिया है, और फ्लोरोसेंट पदार्थ को बुझाया जाएगा, इसलिए प्रतिक्रिया के बाद जल्द से जल्द पहचान की जानी चाहिए, और पूरी प्रक्रिया को जितना संभव हो सके प्रकाश से संरक्षित किया जाना चाहिए।

6. प्रारंभिक सेल एपोप्टोसिस डिटेक्शन को संबंधित चरणों को अनुकूलित करने के लिए प्रारंभिक प्रयोग करने की सिफारिश की जाती है।

7. प्रदूषण से बचने और सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए प्रयोग के दौरान प्रयोगशाला कपड़े और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

यह उत्पाद केवल नैदानिक ​​निदान के लिए वैज्ञानिक अनुसंधान उद्देश्यों के लिए है!

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