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कैलसेइन एम सेल व्यवहार्यता पहचान किट (सीसीके-एफ)

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आयतन: 100t

उपलब्धता स्थिति:
  • G1609-100T
  • Servicebio

उत्पाद वर्णन

उत्पाद की जानकारी

उत्पाद का नाम

बिल्ली। नहीं।

कल्पना।

कैलसेइन एम सेल व्यवहार्यता पहचान किट (सीसीके-एफ)

G1609-100T

100 टी

G1609-500T

500 टी

कैलसेन एएम कैल्सीन (कैल्सीन) पर आधारित है, जो एक एसिटोमेथॉक्सिमेथिल (एएम) समूह पेश करता है। एएम समूह न केवल कैल्सीन के कैल्शेनिंग कैल्शियम के आणविक हिस्से को मास्क करता है बल्कि इसकी हाइड्रोफोबायसिटी को भी बढ़ाता है, इसलिए यह कैल्सीन को आसानी से जीवित कोशिकाओं की झिल्ली में प्रवेश करने की अनुमति दे सकता है और सेल के अंतर्जात एस्टरस द्वारा कैलसेइन में clavein किया जाता है। कैलसेइन जो एएम ग्रुप खो गया है, आसानी से सेल झिल्ली से गुजर नहीं सकता है और इस प्रकार सेल में बनाए रखा जाता है; इसके अलावा, कैल्शियम चेलेटिंग अणु का हिस्सा उजागर होता है, जिससे कैल्सीन जांच को जीवित कोशिकाओं में कैल्शियम आयनों से बांधने और मजबूत हरे रंग की फ्लोरोसेंस उत्सर्जित करने की इजाजत मिलती है। मृत कोशिकाओं में एस्टरस की कमी कैलसेइन को कैलसेइन में हाइड्रोलाइज करने की अनुमति नहीं देती है, इसलिए मृत कोशिकाओं को लेबल नहीं किया जा सकता है। कैलसेइन में कम साइटोटोक्सिसिटी है और सेल फ़ंक्शंस, जैसे सेल प्रसार या लिम्फोसाइट केमोटेक्सिस पर बहुत कम प्रभाव पड़ता है। यह एक फ्लोरोसेंट जांच है जो जीवित कोशिकाओं को धुंधला करने के लिए बहुत उपयुक्त है।

इस उत्पाद कैलसेइन एएम सेल व्यवहार्यता पहचान किट को सेल फ्लोरोसेंस गिनती किट (सीसीके-एफ) भी कहा जाता है, जो सेल व्यवहार्यता, विषाक्तता और प्रसार का मूल्यांकन करने के लिए लाइव कोशिकाओं को लेबल करने के लिए कैल्सीन एएम फ्लोरोसेंट जांच का उपयोग करता है। पहचान किट। अनुकूलन और डिबगिंग के बाद, इस किट में न केवल उच्च पहचान संवेदनशीलता और व्यापक रैखिक सीमा है, बल्कि कोशिकाओं का पता लगाने के लिए ऊष्मायन के थोड़े समय की भी आवश्यकता होती है। ऑपरेशन सरल है, रेडियोसोटोप लेबलिंग की आवश्यकता नहीं है, और क्रिस्टल विघटन जैसे चरणों की आवश्यकता नहीं है, जो प्रयोगात्मक संचालन के कारण त्रुटियों को कम कर सकता है और सटीकता और पुनरावृत्ति में सुधार कर सकता है।

भंडारण और परिवहन

आइस बैग (गीला बर्फ) परिवहन;

-20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। कैलसेइन एएम समाधान अंधेरे में संग्रहीत किया जाना चाहिए, और दोहराया ठंडा और thawing जितना संभव हो सके बचा जाना चाहिए; यह 12 महीने के लिए मान्य है।

उत्पादों की सूची:

बिल्ली। नहीं।

उत्पाद वर्णन

आयतन

G5051-100ml

Dimethyl सल्फोक्साइड डीएमएसओ जैव रासायनिक ग्रेड

100 मिलीलीटर

भंडारण और परिवहन

कमरे के तापमान पर भंडारण और परिवहन, 2 साल के लिए मान्य।

अवयव

घटक संख्या

अवयव

G1609-100T

G1609-500T

G1609-1

कैलसेन एम समाधान

10 μl

50 μl

G1609-2

सीसीके-एफडी डिटेक्शन बफर

10 मिलीलीटर

50 मिलीलीटर

हाथ से किया हुआ

1

ऑपरेशन कदम:

1. Calcein Am पता लगाने की तैयारी समाधान समाधान:

96 अच्छी तरह से प्लेट के प्रति 100 μl की उपयोग राशि के अनुसार, निम्नलिखित तालिका का संदर्भ लें, कैल्सीन एम समाधान और सीसीके-एफ डिटेक्शन बफर को कैल्सीन एम डिटेक्शन वर्किंग समाधान तैयार करने के अनुपात में मिलाएं।

अवयव

10पीसी नमूने

50पीसी नमूने

100पीसी नमूने

कैलसेन एम समाधान

1 μl

5 μl

10 μl

सीसीके-एफ डिटेक्शन बफर

1 मिलीलीटर

5 मिलीलीटर

10 मिलीलीटर

2. अनुवर्ती सेल पहचान:

निम्नलिखित कदम मुख्य रूप से 96-अच्छी प्लेट डिटेक्शन योजना के अनुरूप हैं, और अन्य अच्छी प्लेट सिस्टम को स्थिति के अनुसार समायोजित करने की आवश्यकता है।

ए। सेल बीजिंग प्लेट: एक निश्चित घनत्व पर 96 अच्छी तरह से प्लेट में कोशिकाओं को समान रूप से बीज, और उनके लिए दवाओं या अन्य पूर्व-उपचार लागू करें (बीजिंग घनत्व कोशिका आकार, विकास दर इत्यादि जैसे कारकों द्वारा निर्धारित किया जाता है);

बी। (वैकल्पिक) सेल वॉशिंग: प्रायोगिक परिणामों पर सीरम, फिनोल लाल या दवाओं की हस्तक्षेप को कम करने के लिए मूल संस्कृति माध्यम की आकांक्षा और पीबीएस बफर (जी 4202 अनुशंसित) के साथ 1-2 बार धोएं;

सी। जांच लेबलिंग: सेल संस्कृति माध्यम या पीबीएस बफर को हटाने के बाद, 100 μl कैल्सिन एएम पहचान समाधान समाधान जोड़ें, और 30 मिनट के लिए अंधेरे में 37 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं;

ए। (वैकल्पिक) सेल ऊष्मायन: सेल संस्कृति माध्यम को बदलें और यह सुनिश्चित करने के लिए 15-30 मिनट के लिए सेते रहें कि कोशिकाओं में कैलसेइन एएम पूरी तरह से हाइड्रोलाइज्ड है;

बी। फ्लोरोसेंस डिटेक्शन: फ्लोरोसेंस रीडिंग के लिए एक माइक्रोप्रेट रीडर का उपयोग करें, कैल्सीन एएम जांच की अधिकतम उत्तेजना तरंग दैर्ध्य 501 एनएम है, और अधिकतम उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 521 एनएम है। सेल गतिविधि फ्लोरोसेंस तीव्रता के लिए सीधे आनुपातिक है। विभिन्न प्रयोगात्मक उद्देश्यों के मुताबिक, सेल नाभिक को अन्य उपकरणों (जैसे फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप) द्वारा आगे मुद्रित या पता लगाया जा सकता है।

1. निलंबन सेल पहचान:

ए। सेल बीजिंग: एक निश्चित घनत्व पर 24-अच्छी प्लेट में समान रूप से बीज कोशिकाएं, और उन्हें दवाएं या अन्य पूर्व-उपचार लागू करें (बीजिंग घनत्व कोशिका आकार, विकास की गति इत्यादि जैसे कारकों द्वारा निर्धारित किया जाता है);

बी। (वैकल्पिक) सेल वॉशिंग: मूल माध्यम को हटाने के लिए 3-5 मिनट के लिए 1000 ग्राम पर अपकेंद्रित्र, और पीबीएस बफर के साथ 1-2 बार धो लें, प्रत्येक बार जब आपको सीरम, फेनोल लाल या कम करने के लिए 3-5 मिनट के लिए 1000 ग्राम सेंट्रीफ्यूगेशन की आवश्यकता होती है। प्रयोगात्मक परिणामों के साथ दवाओं में हस्तक्षेप;

सी। जांच लेबलिंग: 3-5 मिनट के लिए 1000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूगेशन के बाद, सेल संस्कृति माध्यम या पीबीएस बफर को हटा दें, उचित मात्रा में कैल्सीन एम डिटेक्शन समाधान समाधान, और अंधेरे में 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए सेते हैं;

डी। (वैकल्पिक) सेल ऊष्मायन: सेल संस्कृति माध्यम को बदलें और यह सुनिश्चित करने के लिए 15-30 मिनट के लिए सेते रहें कि कोशिकाओं में कैलसेइन हूं, पूरी तरह से हाइड्रोलाइजेड है;

इ। फ्लोरोसेंस डिटेक्शन: फ्लोरोसेंस डिटेक्शन के लिए एक माइक्रोप्रेट रीडर या फ्लो साइटोमीटर का उपयोग करें। कैल्सीन एम जांच की अधिकतम उत्तेजना तरंगदैर्ध्य 501 एनएम है, और अधिकतम उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 521 एनएम है। सेल गतिविधि फ्लोरोसेंस तीव्रता के लिए सीधे आनुपातिक है। विभिन्न प्रयोगात्मक उद्देश्यों के अनुसार, कोशिका नाभिक को अन्य उपकरणों (जैसे फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप) के साथ और जांच या पता लगाया जा सकता है।

टिप्पणियाँ:

1. अभिकर्मक हानि को कम करने के लिए उपयोग से पहले कम समय के लिए कैल्सीन एएम समाधान केंद्रीय रूप से केंद्रित किया गया है।

2. कैल्सीन एम समाधान के बार-बार ठंड और thawing से बचें। उत्पाद प्राप्त करने के बाद, उचित रूप से इसे अलग करने की सिफारिश की जाती है और इसे अंधेरे में -20 डिग्री सेल्सियस पर एक सीलबंद कंटेनर में स्टोर किया जाता है।

3. कैलसेन एएम जलीय घोल में अस्थिर है। कैलसेइन एएम डिटेक्शन समाधान को तत्काल उपयोग के लिए तैयार करने की आवश्यकता है, और यह 24 घंटे के भीतर प्रभावी होगा।

4. विभिन्न सेल राज्यों के कारण, ऊष्मायन समय और कैल्सीन एम डिटेक्शनिंग समाधान की एकाग्रता को स्थिति के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।

5. फ्लोरोसेंस तीव्रता को मापने के लिए माइक्रोप्रेट रीडर का उपयोग करते समय, कृपया एक ब्लैक सेल संस्कृति प्लेट का उपयोग करें।

6. फ्लोरोसेंट रंगों में क्वेंचिंग समस्याएं हैं। कृपया उन्हें प्रकाश से दूर करें और स्टोर करें।

7. आपके स्वास्थ्य और सुरक्षा के लिए, ऑपरेशन के दौरान प्रयोगशाला कोट और दस्ताने पहनें।

यह उत्पाद केवल नैदानिक ​​निदान के लिए वैज्ञानिक अनुसंधान उद्देश्यों के लिए है!

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