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डीएनए डिटेक्शन के लिए ब्रॉडयू डिटेक्शन किट

आयतन:50t

उपलब्धता स्थिति:
  • G4102-50T
  • Servicebio

उत्पाद वर्णन

उत्पाद की जानकारी

उत्पाद का नाम

बिल्ली। नहीं।

विनिर्देश

ब्रॉडयू डिटेक्शन किट

G4102-50T

50t

G4102-100T

100 टी

उत्पाद का परिचय:

यह उत्पाद ब्रॉडयू पहचान किट कोशिकाओं और ऊतक खंडों के सेल प्रसार का पता लगाने के लिए प्रयोग किया जाता है। ब्रॉडयू (5-ब्रोमो -2-डीओक्स्यूरिडाइन), जो 5-ब्रोमोडॉक्स्यूरिडाइन है, थाइमिडाइन (टी) का एक एनालॉग है। इस किट का सिद्धांत यह है कि ब्रॉडयू प्रतियोगिता से थाइमिडाइन टी को प्रतिस्थापित कर सकता है। डीएनए संश्लेषण चरण (एस चरण) दर्ज करें। जब ब्रॉडयू को जोरदार विभाजन में कोशिकाओं में शामिल किया जाता है, तो ब्रॉडयू युक्त कोशिकाओं को एक संकेतक प्रणाली के रूप में एंटी-ब्रॉडयू एंटीबॉडी और एंटीबॉडी लिगेज या फ्लोरोसिसिन का उपयोग करके पाया जा सकता है, और दोहरी लेबलिंग के लिए अन्य सेल मार्करों के साथ संयुक्त, कोशिकाओं के प्रसार का न्याय किया जा सकता है प्रकार, प्रसार गति, आदि कोशिका गतिशीलता के अध्ययन के लिए बहुत महत्वपूर्ण हैं। ब्रॉडयू इंट्रावाइटल इंजेक्शन या सेल संस्कृति के माध्यम से ऊतक कोशिकाओं में प्रवेश करता है, और इसमें शामिल डीएनए को सटीक रूप से तैनात किया जाता है, जो एस-चरण कोशिकाओं में नए संश्लेषित डीएनए के स्तर को प्रभावी ढंग से प्रतिबिंबित कर सकता है, और सेल के आंतरिक और बाहरी वातावरण से कम प्रभावित होता है , और लेबल खो नहीं जाएगा।

भंडारण और परिवहन

आइस बैग (गीला बर्फ) परिवहन; टूटना तरल पदार्थ, तरल पदार्थ को अवरुद्ध करना (3% बीएसए), 1 एम एचसीएल को 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है, 4% पैराफॉर्मल्डेहाइड को कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है, एंटी-ब्रॉडयू (माउस एमएबी) -20 डिग्री सेल्सियस, समाप्ति पर संग्रहीत किया जाना चाहिए 12 महीने की तारीख।

अवयव

घटक संख्या

अवयव

G4102-50T

G4102-100T

G4102-1

टूटना द्रव

30 मिलीलीटर

30 मिलीलीटर

G4102-2

सीलिंग तरल पदार्थ (3% बीएसए)

30 मिलीलीटर

30 मिलीलीटर

G4102-3

4% पैराफॉर्मल्डेहाइड

30 मिलीलीटर

30 मिलीलीटर

G4102-4

1 एम एचसीएल

30 मिलीलीटर

30 मिलीलीटर

G4102-5

एंटी-ब्रॉडयू (माउस एमएबी)

50 μl

100 μl

उत्पाद उपयोगकर्ता पुस्तिका

1 पीसी

1 पीसी

प्रयोग तैयारी

1. अपने स्वयं के पीबीएस बफर (अनुशंसित जी 4202), माध्यमिक एंटीबॉडी, ढाल इथेनॉल, माउंटिंग टैबलेट, आदि लाएं।

2. अपने परमाणु धुंधला समाधान लाओ, जी 1004 हेमेटोक्साइलीन दाग या जी 1012 डीएपीआई दाग (तैयार करने के लिए उपयोग) की सिफारिश करें;

3. एंटी-ब्रॉडयू प्राथमिक एंटीबॉडी वर्किंग समाधान तैयार करें: एंटी-ब्रॉडयू (माउस एमएबी) को अवरुद्ध करने के साथ एंटी-ब्रॉडयू (माउस एमएबी) (3% बीएसए) एंटी-ब्रॉडयू प्राथमिक एंटीबॉडी वर्किंग समाधान तैयार करने के लिए 100 बार, इसे वर्तमान उपयोग के लिए तैयार करें, 4 ℃ पर स्टोर करें;

4. माध्यमिक एंटीबॉडी काम समाधान: अपने स्वयं के एचआरपी लेबल (बाद में सफेद प्रकाश पहचान, डीएबी रंग किट, अनुशंसित जी 1212) तैयार करें या फ्लोरोसेंटली लेबल (बाद के फ्लोरोसेंस डिटेक्शन) एंटी-माउस माध्यमिक एंटीबॉडी, और पीबीएस के साथ पतला माध्यमिक एंटीबॉडी काम करने वाले तरल पदार्थ तैयार करने के लिए ।

ऑपरेशन कदम:

सेल नमूना:

1. सेल तैयारी: कोशिका स्लाइड्स को पहले से तैयार करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि कोशिकाएं सामान्य स्थिति में हों और अच्छी तरह से पालन करें;

2. ब्रॉडयू ऊष्मायन: कोशिकाओं को एक निश्चित अवधि के लिए अंधेरे में एक इनक्यूबेटर में ब्रॉडयू युक्त माध्यम के साथ सेते हैं। ब्रॉडयू की एकाग्रता और कोशिकाओं के ऊष्मायन समय सेल प्रकार के आधार पर अलग हैं। पूर्व प्रयोग में सर्वोत्तम स्थितियों का पता लगाने की सिफारिश की जाती है। सावधानी में परीक्षण कोशिकाओं की प्रायोगिक स्थितियां संदर्भ के लिए हैं;

3. सेल निर्धारण: उपर्युक्त कोशिकाओं को ब्रॉडयू के साथ उगाया गया था और प्रत्येक बार पीबीएस के साथ 3 बार धोया गया था। कोशिकाओं को ढंकने के लिए छिद्र में 4% पैराफॉर्मल्डेहाइड के 1 मिलीलीटर जोड़ें, और कमरे के तापमान पर 20-30 मिनट के लिए ठीक करें। पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

4. पारगम्यता: 8-10 मिनट के लिए कोशिकाओं को कवर करने के लिए छिद्र में टूटने वाले तरल पदार्थ को जोड़ें, पीबीएस के साथ 3 बार, 5 मिनट हर बार धो लें;

5. परमाणु धुंधला (वैकल्पिक):

बाद के सफेद प्रकाश पहचान के लिए, हेमेटॉक्सिलिन के साथ सेल न्यूक्लियस को दाग दें: कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए अच्छी तरह से प्लेट के हेमेटोक्साइलीन धुंधला समाधान जोड़ें, हेमेटोक्साइलीन धुंधला समाधान की आकांक्षा करें, और 5 मिनट के लिए पीबीएस के साथ 3 बार धो लें;

बाद के फ्लोरोसेंस डिटेक्शन के लिए, डीएपीआई के साथ सेल नाभिक दाग: कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए अच्छी तरह से प्लेट में डीएपीआई डाई समाधान जोड़ें, डीएपीआई डाई समाधान की आकांक्षा करें, और प्रत्येक बार 5 मिनट के लिए पीबीएस के साथ 3 बार धो लें;

6. पुन: निर्धारण: अच्छी तरह से प्लेट में 4% पैराफॉर्मल्डेहाइड ड्रॉपवाइज जोड़ें और कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए सेते हैं, पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

7. अम्लीकरण: कोशिकाओं को कवर करने के लिए अच्छी तरह से प्लेट में 1 मीटर एचसीएल ड्रॉपवाइज जोड़ें, 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए इलाज करें, पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

8. पोस्ट-फिक्सेशन: अच्छी तरह से प्लेट में 4% पैराफॉर्मल्डेहाइड ड्रॉपवाइज जोड़ें, कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए सेते हैं, पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

9. अवरुद्ध: अच्छी तरह से प्लेट में अवरुद्ध समाधान (3% बीएसए) ड्रॉपवाइज जोड़ें और कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए सेते हैं। अवरुद्ध समाधान को अवशोषित और त्यागें, साफ न करें;

10. एंटी-ब्रॉडयू एंटीबॉडी ऊष्मायन: कोशिकाओं को कवर करने के लिए अच्छी तरह से प्लेट में एंटी-ब्रॉडयू प्राथमिक एंटीबॉडी वर्किंग समाधान ड्रॉपवाइज जोड़ें, और रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं। एंटी-ब्रॉडयू प्राथमिक एंटीबॉडी काम समाधान को आकांक्षा और त्यागें, पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

11. माध्यमिक एंटीबॉडी ऊष्मायन: कोशिकाओं को कवर करने के लिए अच्छी तरह से प्लेट में माध्यमिक एंटीबॉडी काम करने वाले समाधान को छोड़ दें, और 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर सेते हैं। द्वितीयक एंटीबॉडी के कामकाजी समाधान को आकांक्षा और त्यागें, और प्रत्येक बार पीबीएस 3 गुना, 5 मिनट के साथ धो लें। ध्यान दें कि यदि आप फ्लोरोसेंटली लेबल वाले माध्यमिक एंटीबॉडी का उपयोग करते हैं, तो आपको ऊष्मायन और धुलाई के दौरान प्रकाश से बचने की आवश्यकता है;

12. कवरिंग और माइक्रोस्कोपिक परीक्षा:

यदि यह एक एचआरपी लेबल वाला माध्यमिक एंटीबॉडी है, तो सेल नमूना, निर्जलीकरण, और पारदर्शिता का रंग विकसित करने के लिए डीएबी क्रोमोजेनिक अभिकर्मक (जी 1212 अनुशंसित) का उपयोग करें। धीरे-धीरे स्लाइड लेने के लिए एक नुकीले चिमटी का उपयोग करें और इसे एक साफ ग्लास स्लाइड पर उल्टा घुमाएं। , माइक्रोस्कोप अवलोकन;

यदि यह एक फ्लोरोसेंटली लेबल वाला माध्यमिक एंटीबॉडी है, तो स्वच्छ ग्लास स्लाइड पर एक विरोधी फ्लोरोसेंस क्वेंचिंग माउंट (जी 1401 की सिफारिश की जाती है), धीरे-धीरे स्लाइड को इंगित चिमटी के साथ उठाएं, ग्लास स्लाइड पर उल्टा बकसुआ और स्लाइड को घुमाएं, इसके साथ निरीक्षण करें एक फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप;

ऊतक खंड नमूने:

1. पशु तैयारी: पहले से प्रयोगात्मक जानवरों को तैयार करें और विवो में ब्रॉडयू लेबलिंग को तैयार करें, कृपया WGB8010 देखें। विवो में लेबलिंग के बाद, प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार सामग्री लें, फिक्स करें और पैराफिन अनुभाग तैयार करें;

2. ऊतक पैराफिन अनुभाग deparaffinized और पुनरावर्तित हैं;

3. मरम्मत: ऊतक को सर्कल करने के लिए ब्रश समूह, एंटीजन पुनर्प्राप्ति समाधान में टुकड़ा विसर्जित करें, और माइक्रोवेव हीटिंग द्वारा मरम्मत करें। प्राकृतिक शीतलन

4. परमाणु धुंधला (वैकल्पिक):

बाद के सफेद प्रकाश पहचान के लिए, हेमेटॉक्सिलिन के साथ सेल न्यूक्लियस को दाग दें: कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए अच्छी तरह से प्लेट के हेमेटोक्साइलीन धुंधला समाधान जोड़ें, हेमेटोक्साइलीन धुंधला समाधान की आकांक्षा करें, और 5 मिनट के लिए पीबीएस के साथ 3 बार धो लें;

बाद के फ्लोरोसेंस डिटेक्शन के लिए, डीएपीआई के साथ सेल नाभिक दाग: कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए अच्छी तरह से प्लेट में डीएपीआई डाई समाधान जोड़ें, डीएपीआई डाई समाधान की आकांक्षा करें, और प्रत्येक बार 5 मिनट के लिए पीबीएस के साथ 3 बार धो लें;

5. पुन: निर्धारण: ऊतक को 4% पैराफॉर्मल्डेहाइड ड्रॉपवाइज जोड़ें और कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए सेते हैं, पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

6. अम्लीकरण: ऊतकों को ढकने के लिए स्लाइस में 1 मीटर एचसीएल जोड़ें, उन्हें 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए इलाज करें, उन्हें पीबीएस 3 गुना, 5 मिनट हर बार धो लें;

7. पोस्ट-फिक्सेशन: 4% पैराफॉर्मल्डेहाइड को अच्छी तरह से प्लेट में फिर से जोड़ें और 10 मिनट के लिए सेते हैं, पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

8. एंडोजेनस पेरोक्साइडस क्वेंचिंग (वैकल्पिक): स्लाइस में 3% H2O2 ड्रॉपवाइज जोड़ें और एंडोजेनस पेरोक्साइडस को हटाने के लिए 25-30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर सेते हैं। फिर स्लाइस पीबीएस के साथ 3 बार धोया गया, हर बार 5 मिनट;

9. अवरुद्ध: ऊतक को कवर करने के लिए स्लाइस में अवरुद्ध समाधान (3% बीएसए) जोड़ें, और कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए सेते हैं। अवरुद्ध तरल पदार्थ निकालें, साफ न करें;

10. एंटी-ब्रॉडु एंटीबॉडी ऊष्मायन: ऊतक को कवर करने के लिए स्लाइस के लिए एंटी-ब्रॉडयू प्राथमिक एंटीबॉडी काम करने का समाधान जोड़ें, और रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं। एंटी-ब्रॉडयू प्राथमिक एंटीबॉडी काम समाधान को हटा दें, पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

11. माध्यमिक एंटीबॉडी ऊष्मायन: ऊतक को कवर करने के लिए सेकेंड में माध्यमिक एंटीबॉडी के कामकाजी समाधान को जोड़ें, और कमरे के तापमान पर 1 एच के लिए सेते हैं। माध्यमिक एंटीबॉडी के कामकाजी समाधान को हटा दें, पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट। ध्यान दें कि यदि आप फ्लोरोसेंटली लेबल वाले माध्यमिक एंटीबॉडी का उपयोग करते हैं, तो आपको ऊष्मायन और धुलाई के दौरान प्रकाश से बचने की आवश्यकता है;

12. कवरिंग और माइक्रोस्कोपिक परीक्षा:

यदि यह एचआरपी लेबल वाला माध्यमिक एंटीबॉडी है, तो ऊतक खंड, निर्जलीकरण, पारदर्शी, और बढ़ते हुए माइक्रोस्कोप के तहत निरीक्षण के लिए डीएबी क्रोमोजेनिक अभिकर्मक (जी 1212 अनुशंसित) का उपयोग करें;

यदि यह एक फ्लोरोसेंटली लेबल वाला माध्यमिक एंटीबॉडी है, तो फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप के साथ माउंट और निरीक्षण करने के लिए ड्रॉपवाइड एंटी-फ्लोरोसेंस क्वेंचिंग माउंटिंग टैबलेट (जी 1401 अनुशंसित) जोड़ें।

परिणामों का अवलोकन

यदि एचआरपी लेबल वाले माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ पता चला है, तो नाभिक गहरा नीला है, और प्रजनन कोशिकाएं भूरे रंग की हैं। यदि यह एक फ्लोरोसेंटली लेबल वाला माध्यमिक एंटीबॉडी है, तो न्यूक्लियस नीली फ्लोरोसेंस (EX = 358 एनएम, ईएम = 461 एनएम) दिखाएगा, और प्रजनन कोशिकाएं संबंधित माध्यमिक एंटीबॉडी के फ्लोरोसेंस को दिखाएंगी।

टिप्पणियाँ:

1. सेल स्लाइड नमूने के लिए, ब्रॉडयू का एकाग्रता और प्रसंस्करण समय सेल प्रकारों से संबंधित है। आम तौर पर, ट्यूमर कोशिकाओं के इलाज के लिए आवश्यक एकाग्रता और समय कम होता है। फाइब्रोब्लास्ट्स या उपकला कोशिकाओं जैसे धीमे प्रसार वाले कोशिकाओं को एकाग्रता बढ़ाने और कार्रवाई के समय को बढ़ाने की आवश्यकता होती है। अनुशंसित एकाग्रता सीमा 20-100 माइक्रोन है और कार्रवाई का समय 40 मिनट है। -4 घंटे, विशिष्ट सेल प्रकारों के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।

निम्न तालिका केवल संदर्भ के लिए आमतौर पर उपयोग की जाने वाली सेल उपचार एकाग्रता और समय परीक्षण दिखाती है।

कक्ष

ब्रॉडु एकाग्रता (μm)

ऊष्मायन समय (न्यूनतम)

A549

40

40

हेला

40

40

एनआरके -52 ई

40

40

Skov3

80

120

H9C2

40

40

2. सर्वोत्तम प्रयोगात्मक परिणामों को सुनिश्चित करने के लिए, हमारी कंपनी द्वारा उत्पादित अन्य सहायक अभिकर्मकों का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है: हेमेटॉक्सिलिन दाग (जी 1004); डीएपीआई दाग (जी 1012); डीएबी रंग अभिकर्मक किट (जी 1212), विरोधी फ्लोरोसेंस क्वेंचिंग माउंटिंग टैबलेट (जी 1401);

3. आपकी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के लिए प्रयोगशाला कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

यह उत्पाद केवल वैज्ञानिक अनुसंधान उद्देश्यों के लिए है, न कि नैदानिक ​​निदान के लिए!

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