बीसीए प्रोटीन मात्रात्मक पहचान किट

उत्पाद का परिचय:

प्रोटीन एकाग्रता के मात्रात्मक पहचान के लिए दो सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले तरीके हैं: ब्रैडफोर्ड और बीसीए। बीसीए विधि द्वारा प्रोटीन की मात्रात्मक पहचान का मूल सिद्धांत बायुरेट प्रतिक्रिया पर आधारित है, जो कि सीयू 2 + क्षारीय स्थितियों के तहत कम है सीयू +, और फिर बीसीए (बिकिनिक एसिड, एक क्रोमोजेनिक एजेंट) के साथ chelating है। प्रत्येक अणु एक सीयू chelates, एक बैंगनी पानी घुलनशील परिसर बनाने के लिए। पदार्थ में 562 एनएम पर उच्चतम अवशोषण मूल्य है और रंग गहराई प्रोटीन एकाग्रता के आनुपातिक है, इसलिए इसका उपयोग प्रोटीन के मात्रात्मक पहचान के लिए किया जा सकता है, प्रोटीन एकाग्रता में 50-2000μg / मिलीलीटर एकाग्रता में एक अच्छा रैखिक संबंध है।

यह विधि अधिकांश नमूनों में रासायनिक पदार्थों से प्रभावित नहीं होती है, स्केल रीमूवर की उच्च सांद्रता के साथ संगत, एसडीएस, 5% तक सांद्रता के साथ ट्राइटन एक्स -100 का 5%, ट्विन -20,60,80, आदि का 5% शामिल है । लेकिन एजेंटों को चेलेटिंग एजेंटों और कम करने वाले एजेंटों की उच्च सांद्रता परिणामों को प्रभावित करती है, 10 मिमी से नीचे ईडीटीए एकाग्रता के नमूने में कोई ईजीटीए सुनिश्चित नहीं करती है, 1 मिमी से कम डीटीटी, β-mercaptoethanol 1 मिमी से नीचे है। यदि नमूना में एक चेलेटिंग एजेंट या कम करने वाला एजेंट होता है, तो हमारे अन्य उत्पादों G2001 ब्रैडफोर्ड प्रोटीन मात्रात्मक पहचान किट पर विचार करें।

पैकेज सामग्री:

अवयव:

गोदाम की स्थिति:

पूरे अभिकर्मकों किट को कमरे के तापमान पर पहुंचाया जा सकता है; प्रोटीन मानक (बीएसए) 4 ℃ पर संग्रहीत किया जाता है, 12 महीने के लिए मान्य है। प्रोटीन मानक समाधान के बाद, -20 ℃ पर संग्रहीत और 6 महीने के भीतर उपयोग किया जाता है। शेष अभिकर्मकों को कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जाता है और 12 महीने के लिए मान्य होता है।

उपयोग:

1. प्रोटीन मानक रिजर्व समाधान: 1 मिलीलीटर प्रोटीन मानक तैयारी समाधान बीएसए प्रोटीन मानक ट्यूब में जोड़ा गया था, और 25 एमजी प्रोटीन मानक पूरी तरह से भंग कर दिया गया था, यह 25 मिलीग्राम / मिलीलीटर की एकाग्रता के साथ प्रोटीन मानक रिजर्व समाधान प्राप्त किया गया था। प्रोटीन मानक समाधान को लंबे समय तक -20 ℃ के लिए संरक्षित किया जा सकता है।

2. प्रोटीन मानक कार्य समाधान की तैयारी: 25 एमजी / एमएल प्रोटीन मानक रिजर्व समाधान की उचित मात्रा लें, पीबीएस या सामान्य नमकीन समाधान के साथ 50 टाइम्स को पतला करें, 0.5 मिलीग्राम / मिलीलीटर की अंतिम एकाग्रता के साथ प्रोटीन मानक कार्य समाधान प्राप्त करें। सटीक कमजोर पड़ने के लिए 10 गुना ढाल विधि के अनुसार कमजोर पड़ने पर ध्यान दें।

3. मानक वक्र (एंजाइम लेबलिंग विधि): प्रोटीन मानक कामकाजी समाधान क्रमशः 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20ul के अनुसार 96 अच्छी प्लेट में जोड़ा गया था, और फिर 20, 1 9, 18, 16 जोड़ा गया था , 12, 8, 4, 0uएल पीबीएस या सामान्य नमकीन समाधान के साथ, और फिर ढाल काम करने का समाधान 20ul तक भर गया था। फिर 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500ug / मिलीलीटर की प्रोटीन एकाग्रता के ढाल वक्र प्राप्त किया गया था।

4. परीक्षण करने के लिए नमूने की तैयारी: परीक्षण किए जाने वाले प्रोटीन नमूने ठीक से पतला होते हैं (नमूना की प्रोटीन एकाग्रता मानक वक्र में निर्धारित की जा सकती है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि परीक्षण परिणाम विश्वसनीय हैं) और 96 अच्छी प्लेट में जोड़े गए प्रति नमूना 20μl की राशि। नमूना का परीक्षण किया जाना चाहिए और प्रोटीन मानक को एक ही समाधान के साथ पतला कर दिया गया था।

5. बीसीए क्रोमोजेनिक कार्य समाधान की तैयारी: बीसीए अभिकर्मक और तांबा सल्फेट समाधान को बीसीए क्रोमोजेनिक काम समाधान प्राप्त करने के लिए 50: 1 वॉल्यूम अनुपात के अनुसार समान रूप से मिश्रित किया गया था। बीसीए क्रोमोजेनिक काम करने वाले तरल पदार्थ को 24 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है। प्रत्येक नमूने का परीक्षण 200μL की आवश्यकता है, जो अपशिष्ट से बचने के लिए मांग पर तैयार होने का सुझाव दिया जाता है।

6. टेस्ट: बीसीए क्रोमोजेनिक वर्किंग फ्लूइड को मानक वक्र नमूना छेद और नमूना छेद के लिए नमूना छेद का परीक्षण करें (96 अच्छी प्लेट को 30 के लिए ऑसीलेटर पर रखा जा सकता है), 37 ℃ प्रतिक्रिया के 30 मिनट के बाद, मानक वक्र 0 का उपयोग करके संदर्भ के रूप में, 562 एनएम तरंगदैर्ध्य पर कलरिमेट्री, प्रत्येक छेद के अवशोषण रिकॉर्ड करें। (नोट: प्रतिक्रिया कमरे के तापमान 2 एच, या 60 ℃ प्रतिक्रिया 30 मिनट पर भी हो सकती है। यदि प्रोटीन एकाग्रता कम है, तो यह 60 ℃ प्रतिक्रिया की सिफारिश की जाती है)

7. गणना: मानक वक्र को लंबवत समन्वय के रूप में क्षैतिज समन्वय और अवशोषण के रूप में ढाल प्रोटीन सामग्री (μg / मिली) के साथ खींचा जाता है। नमूना की अवशोषण के अनुसार, संबंधित छेद में परीक्षण किए जाने वाले नमूने के प्रोटीन एकाग्रता (μg / मिली) को मानक वक्र पर पाया जा सकता है, और फिर नमूना के सौम्य बहुतायत से गुणा किया जाता है, वास्तविक प्रोटीन एकाग्रता है नमूना परीक्षण किया जाएगा।

टिप्पणियाँ:

1. बीसीए प्रोटीन मात्रात्मक पहचान तापमान और समय से काफी प्रभावित है, अवशोषण मूल्य समय की लम्बाई या तापमान में वृद्धि के साथ बदल जाएगा। यदि रंग प्रतिक्रिया का समय और तापमान सटीक रूप से नियंत्रित नहीं किया जा सकता है, तो यह सुझाव दिया जाता है कि प्रत्येक निर्धारण के लिए एक मानक वक्र बनाया जाना चाहिए।

2. प्रोटीन मानक रिजर्व समाधान तैयार करते समय, पर्याप्त विघटन सुनिश्चित करना आवश्यक है। प्रोटीन के मानक कामकाजी समाधान को कम करते समय, 10 गुना ढाल को कम करने की सिफारिश की जाती है, एक समय में 50 बार पतला करने के लिए, ताकि बड़ी त्रुटि से बच सकें।

3. प्रोटीन की सटीक मात्रा सुनिश्चित करने के लिए, नमूना निष्कर्षण और प्रोटीन मानक को कमजोर करने के लिए एक ही बफर समाधान चुनना बेहतर होता है, जो पहचान की शर्तों के अनुरूप है। यदि बफर के पास एक उच्च पृष्ठभूमि मान है, तो अन्य तरीकों का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है।

4. ऑपरेशन के दौरान कृपया प्रयोगशाला के कपड़े और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।