सेल चक्र और एपोप्टोसिस पहचान किट

उत्पाद की जानकारी

उत्पाद का परिचय:

सेल चक्र पूरी प्रक्रिया को संदर्भित करता है कि एक सेल एक विभाजन के पूरा होने से अगले विभाजन के अंत तक चला जाता है। यह मुख्य रूप से दो चरणों में विभाजित है: इंटरफेस और माइटोसिस (एम चरण); इंटरसेलुलर चरण मुख्य रूप से डीएनए संश्लेषण (जी 1 चरण) के भविष्यवाणी से बना है। ), डीएनए संश्लेषण चरण (एस चरण) और देर डीएनए संश्लेषण (जी 2 चरण)। पूरे सेल चक्र में परिवर्तनों का अनुक्रम जी 1 → एस → जी 2 → एम द्वारा दर्शाया जा सकता है। सबसे पहले, जी 1 अवधि: सेल मुख्य रूप से आरएनए और प्रोटीन और अन्य पदार्थों को संश्लेषित करता है ताकि एस चरण में प्रवेश करने के लिए सामग्री और ऊर्जा के लिए सेल तैयार किया जा सके; फिर एस चरण में प्रवेश करता है: सेल डीएनए और कुछ हिस्टोन को संश्लेषित करना शुरू कर देता है, और सेल की डीएनए सामग्री बढ़ने लगती है; अंत में जी 2 चरण: इस समय, सेल की डीएनए सामग्री जी 1 अवधि की दो बार बन गई है, और डीएनए प्रतिकृति बंद हो गई है, और बड़ी मात्रा में प्रोटीन और अन्य पदार्थों को मिटोसिस अवधि में प्रवेश करने के लिए संश्लेषित किया जाता है; यदि जी 0 (कोशिकाएं अस्थायी रूप से विभाजन और भेदभाव अवधि को रोकती हैं), क्विज़ेंट चरण) / जी 1 चरण, सेल में डीएनए सामग्री 1 एन है; फिर जी 2 चरण में सेल में डीएनए सामग्री 2 एन है; और जी 1 और जी 2 चरण में एस चरण सेल, डीएनए सामग्री 1 एन और 2 एन के बीच है; और एपोप्टोटिक कोशिकाओं में, न्यूक्लियस संघनन और डीएनए विखंडन से गुजरता है, जिसके परिणामस्वरूप कुछ जीनोमिक डीएनए टुकड़ों का नुकसान होता है, इसलिए इसकी डीएनए सामग्री 1 एन से कम होती है। तथाकथित उप-जी 1 पीक प्रवाह साइटोमेट्री की फ्लोरोसेंस छवि पर दिखाई देता है, यानी एपोप्टोटिक कोशिकाएं। शिखर। इसलिए, सेल के चक्र और राज्य को सेल डीएनए की सामग्री के अनुसार तय किया जा सकता है।

एक प्रवाह साइटोमीटर के साथ कोशिकाओं के प्रकाश बिखरने में परिवर्तनों को देखकर एपोप्टोसिस का भी पता लगाया जा सकता है। जब एक कोशिका एपोप्टोसिस से गुजरती है, तो एपोप्टोटिक निकायों का उत्पादन साइटप्लाज्म और क्रोमैटिन और परमाणु विखंडन के घनत्व के कारण होता है, जो कोशिका के प्रकाश बिखरने वाले गुणों को बदलता है। एपोप्टोसिस के शुरुआती चरण में, क्रोमैटिन सिकुड़ता है, सेल घनत्व बढ़ता है, और आगे कोण प्रकाश बिखरने वाला रंग काफी कम हो जाता है; एपोप्टोसिस के स्वर्गीय चरण में, कोशिकाएं एपोप्टोटिक निकायों का उत्पादन करती हैं, और आगे कोण प्रकाश बिखरने और पार्श्व कोण प्रकाश बिखरने में काफी कमी आई है।

सेल चक्र और एपोप्टोसिस विश्लेषण किट सेल चक्र और एपोप्टोसिस का पता लगाने और विश्लेषण करने के लिए क्लासिक प्रोपिडियम धुंधला विधि का उपयोग करता है। प्रोपिडियम आयोडाइड का उपयोग डबल-फ्रांसीसी डीएनए में एम्बेड किया जा सकता है और इसे फ्लोरोसेंट बना सकता है, और फ्लोरोसेंस तीव्रता डबल-फंसे डीएनए की सामग्री के समान आनुपातिक है; विभिन्न सेल चक्रों में डीएनए सामग्री में नियमित परिवर्तनों के साथ संयुक्त, यह सेल चक्र और स्थिति को अलग कर सकता है। इस किट का उपयोग सेल चक्र और ऊतक कोशिकाओं, अनुवर्ती या निलंबित कोशिकाओं के एपोप्टोसिस का पता लगाने के लिए किया जा सकता है (यदि इसका उपयोग ऊतक सेल चक्र और एपोप्टोसिस डिटेक्शन के लिए किया जाता है, तो डिटेक्शन किए जाने से पहले ऊतक को एक सेल स्थिति में पचा जाना चाहिए)।

भंडारण और परिवहन

गीले बर्फ में परिवहन; अंधेरे में -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें, और 4 डिग्री सेल्सियस पर धुंधला बफर में स्टोर करें; 12 महीने के लिए मान्य।

अवयव

प्रयोग तैयारी

1. सेल संस्कृति माध्यम जिसमें सीरम होता है;

2. Trypsin Digestion समाधान (G4001 अनुशंसित है);

3. पीबीएस बफर (जी 4202 अनुशंसित);

4. 75% इथेनॉल।

ऑपरेशन कदम:

1. सेल नमूना तैयारी (कोशिकाओं की संख्या 1 × 105 ~ 1 × 106 पर नियंत्रित होती है)

1.1। अनुवर्ती कोशिकाओं के लिए: संस्कृति माध्यम को हटा दें, कोशिकाओं को पचाने के लिए ट्राप्सिन पाचन समाधान जोड़ें, कोशिकाओं को माइक्रोस्कोप के नीचे गोल और ढीला होने का निरीक्षण करें, पाचन को रोकने के लिए सीरम युक्त सेल संस्कृति माध्यम की उचित मात्रा जोड़ें, धीरे-धीरे कोशिकाओं को दूर करें कोशिकाओं को निलंबन बनाने के लिए; निलंबन को अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें, 3-5 मिनट के लिए 1000 ग्राम पर अपकेंद्रित्र, सतह पर तैरनेवाला छोड़ दें, और सेल गोली को बनाए रखें; फिर 1-2 गुना, अपकेंद्रित्र के लिए प्री-कूल्ड पीबीएस बफर के साथ सेल गोली को कुल्लाएं और सतह पर तैरनेवाला को उसी तरह छोड़ दें, सेल गोली रखें।

1.2। निलंबित कोशिकाओं के लिए: सीधे कोशिकाओं को अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें, 3-5 मिनट के लिए 1000 ग्राम पर अपकेंद्रित्र, सतह पर तैरनेवाला छोड़ दें, और सेल गोली को बनाए रखें; फिर सेल गोली को 1-2 बार के लिए पूर्व-ठंडा पीबीएस बफर के साथ कुल्लाएं, और अपकेंद्रित्र उसी तरह से सतह पर तैरनेवाला छोड़ दें और सेल गोली को बचाएं।

1.3। ऊतक कोशिकाओं के लिए: ऊतक को जितना संभव हो सके छोटे टुकड़ों में काट लें, ऊतक के स्रोत के अनुसार ऊतक के टुकड़ों को पचाने के लिए ट्राप्सिन, कोलेजेनेज और अन्य पाचन एंजाइम का चयन करें, और एक एकल सेल प्राप्त करने के लिए 100-300 जाल स्क्रीन के साथ फ़िल्टर करें निलंबन; फ़िल्टरिंग के बाद सेल निलंबन को अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करने के बाद, 3-5 मिनट के लिए 1000 ग्राम पर अपकेंद्रित्र, सतह पर तैरनेवाला छोड़ दें, और सेल गोली को बचाएं; फिर 1-2 गुना, अपकेंद्रित्र के लिए प्री-कूल्ड पीबीएस बफर के साथ सेल गोली को कुल्लाएं और उसी तरह से सतह पर तैरनेवाला छोड़ दें। सेल छर्रों।

2. सेल नमूना निर्धारण

2.1। एकत्रित सेल गोली के नमूनों को बर्फ पर 75% इथेनॉल प्री-कूल्ड के 1 मिलीलीटर जोड़ें, और धीरे-धीरे कोशिकाओं को पूरी तरह से संपर्क करने के लिए उड़ाएं;

2.2। 30 मिनट या उससे अधिक समय के लिए 4 ℃ पर कोशिकाओं को ठीक करें (आमतौर पर 2 एच या उससे अधिक के लिए फिक्सिंग धुंधला प्रभाव सुनिश्चित कर सकता है, और 12-24 एच के लिए फिक्सिंग अधिक प्रभावी हो सकता है, जो धुंधला प्रभाव में सुधार कर सकता है)।

2.3। समय की एक निश्चित अवधि के लिए फिक्सिंग के बाद, कोशिकाओं को 3-5 मिनट के लिए 1000 ग्राम पर अपकेंद्रित्र, इथेनॉल फिक्सेटिव को हटा दें, और सेल गोली को बनाए रखें;

2.4। कोशिकाओं को फैलाने के लिए अपकेंद्रित्र ट्यूब के नीचे टैप करें, पीबीएस बफर में कोशिकाओं को पुन: पेश करें और 3-5 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र अपकेंद्रित्र, सेल गोली एकत्र करने के लिए सतह पर तैरनेवाला छोड़ दें;

3. रंगाई काम करने वाले तरल पदार्थ की तैयारी और रंगाई

3.1। निम्नलिखित तालिका के अनुसार रंगाई कार्य समाधान तैयार करें और प्रकाश से बचें। उपयोग की आवश्यकताओं के अनुसार तैयारी की मात्रा को समान अनुपात में बढ़ाया जा सकता है या कम किया जा सकता है (तैयार रंगाई कार्य समाधान को कम समय में 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है, कृपया इसे उसी दिन उपयोग करें);

3.2। चरण 2.4 में प्रक्षेपित कोशिकाओं को फैलाने के लिए अपकेंद्रित्र ट्यूब के नीचे टैप करें, और उसके बाद तैयार धुंधला काम समाधान के 500 μl जोड़ें, धीरे-धीरे कोशिकाओं को फैलाने के लिए पिपेटिंग और धुंधला काम समाधान के साथ मिश्रण;

3.3। अंधेरे में 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस सेते हैं, और फिर पहचान के लिए प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग करें।

4. प्रवाह का पता लगाने और विश्लेषण

प्रकाश स्कैटरिंग का पता लगाने के दौरान, 488 एनएम की उत्तेजना तरंग दैर्ध्य पर लाल फ्लोरोसेंस का पता लगाने के लिए एक प्रवाह साइटोमीटर का उपयोग किया गया था। सेल डीएनए सामग्री विश्लेषण और प्रकाश बिखरने विश्लेषण के लिए उपयुक्त विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करें।

टिप्पणियाँ:

1. फ्लोरोसेंट रंगों में फ्लोरोसेंस क्वेंचिंग समस्याएं होती हैं, इसलिए उपयोग और भंडारण के दौरान प्रकाश से बचने की कोशिश करें;

2. प्रयोग से पहले, विभिन्न सेल चक्र के कारण बड़े दोहराव अंतर से बचने के लिए सेल चक्र को सिंक्रनाइज़ करने की सिफारिश की जाती है;

3. प्रायोगिक सेल रोपण घनत्व संपर्क अवरोध या घनत्व निर्भरता को रोकने के लिए बहुत अधिक या बहुत कम नहीं होना चाहिए; 4. पीआई धुंधला समाधान को संभालने पर, सुरक्षा पर ध्यान दें और मानव शरीर या इनहेलेशन के साथ सीधे संपर्क से बचें;

5. ऑपरेशन के दौरान कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

यह उत्पाद केवल वैज्ञानिक अनुसंधान उद्देश्यों के लिए है, न कि नैदानिक ​​निदान के लिए!