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सेल संस्कृति के लिए mycoplasma पहचान किट पीसीआर विधि

विशिष्टता: 50 टी
उपलब्धता स्थिति:
  • G1900-50T
  • Servicebio
  • सर्विसबियो

उत्पाद वर्णन

G1900-50T

परिचय:

माइकोप्लाज्मा प्रदूषण कोशिकाओं के सभी पहलुओं पर प्रतिकूल प्रभाव पैदा कर सकता है, और सेल संस्कृति में अत्यधिक मूल्यवान मुद्दा बन गया है। इसलिए, नियमित mycoplasma प्रदूषण परीक्षण करने के लिए यह बहुत जरूरी है। यह माइकोप्लाज्मा टेस्ट किट विशेष रूप से विभिन्न संवर्धित सेल जैविक सामग्री (जैसे सेल संस्कृति, प्रयोगशाला पशु स्राव, पशु सीरम, आदि) में माइकोप्लाज्मा प्रदूषण का पता लगाने के लिए पीसीआर विधि को गोद लेती है। किट में उपयोग किए गए मिश्रित प्राइमर्स विशिष्ट प्राइमर्स हैं जो माइकोप्लाज्मा 16 एस आरआरएनए अनुक्रम के संरक्षित क्षेत्रों के लिए डिज़ाइन किए गए हैं। सेल संस्कृति तरल पदार्थ को सीधे एक पीसीआर टेम्पलेट के रूप में उपयोग किया जा सकता है जो विशेष रूप से माइकोप्लाज्मा डीएनए को मिलान करने के लिए mycoplasma पीसीआर मिश्रण (2 ×) के साथ संशोधित करने के लिए किया जा सकता है, पूरी प्रक्रिया 2 घंटे में पूरी की जा सकती है। इस किट में उच्च पहचान संवेदनशीलता है और माइकोप्लाज्मा की 20 प्रतियों के रूप में कुछ पता लगा सकता है।

भंडारण और परिवहन

आइस बैग (गीला बर्फ) परिवहन; -20 डिग्री सेल्सियस संरक्षण, 12 महीने के लिए मान्य।

घटक संख्या

अवयव

G1900-50T

G1900-1

Mycoplasma पीसीआर मिक्स (2 ×)

1 मिलीलीटर

G1900-2

Mycoplasma प्राइमर मिश्रण

100 μl

G1900-3

सकारात्मक नियंत्रण

50 μl

G1900-4

Mycoplasma मुक्त पानी

1 मिलीलीटर

हाथ से किया हुआ

1 份

कदम

1. नमूना तैयारी: एक स्वच्छ पीसीआर ट्यूब में परीक्षण करने के लिए सेल संस्कृति सतह पर तैरनेवाला की उचित मात्रा में लें, एक टेम्पलेट के रूप में एक पीसीआर मशीन का उपयोग करके इसे 5 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर गर्म करें। सीरम नमूने को mycoplasma मुक्त पानी के साथ पतला किया जा सकता है, और नमूना की एक उचित राशि एक साफ पीसीआर ट्यूब में लिया जा सकता है और एक पीसीआर मशीन के साथ एक टेम्पलेट के रूप में 5 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर हीट-इलाज किया जा सकता है;

2. पीसीआर सिस्टम तैयारी: प्रत्येक प्रयोग को एक नकारात्मक नियंत्रण स्थापित करने की आवश्यकता होती है (नमूना के 1 μl को उसी मात्रा में माइकोप्लाज्मा मुक्त पानी के साथ परीक्षण किया जाना चाहिए) और सकारात्मक नियंत्रण (नमूना को सकारात्मक नियंत्रण के 0.5 μl जोड़ें) एक टेम्पलेट के रूप में परीक्षण किया जाए), प्रयोग के दौरान डिस्पोजेबल मास्क और दस्ताने पहनें, और एक्सोजेनस माइकोप्लाज्मा प्रदूषण को शुरू करने से अनुचित संचालन को रोकने के लिए सावधानी से संचालित करें;

अवयव

आयतन

टेम्पलेट

1 μl

Mycoplasma प्राइमर मिश्रण

2 μl

Mycoplasma पीसीआर मिक्स (2 ×)

10 μl

Mycoplasma मुक्त पानी

20 μl तक

3. पीसीआर प्रोग्राम सेटिंग्स:

कदम

तापमान

Time

साइकिल

प्रारंभिक denaturation

98 ℃

2 मिन्ट

1

विकृतीकरण

98 ℃

20 एस

30

एनीलिंग

56 ℃

25 एस

विस्तार

72 ℃

10 एस

अंतिम विस्तार

72 ℃

5 मिनट

1

पकड़

4-16 ℃

हमेशा के लिए


4. जेल इलेक्ट्रोफोरोसिस: पीसीआर उत्पाद के 10 μl लें और इलेक्ट्रोफोरोसिस डिटेक्शन के लिए 1% agarose जेल का उपयोग करें;

5. परिणाम विश्लेषण: प्रत्येक प्रयोग नकारात्मक नियंत्रण और सकारात्मक नियंत्रण के साथ परीक्षण परिणामों की तुलना करके नमूना के माइकोप्लाज्मा प्रदूषण की पुष्टि करता है। सकारात्मक बैंड का आकार लगभग 500 बीपी है। यदि नकारात्मक नियंत्रण परीक्षा परिणाम में एक बैंड है, तो यह बहुत संभावना है कि पीसीआर सिस्टम में प्रदूषण है, और परिणाम की पुष्टि करने के लिए पुन: प्रयोग करने की सिफारिश की जाती है। यदि आवश्यक हो, तो पीसीआर उत्पादों को नियमित रूप से विशिष्ट माइकोप्लाज्मा प्रजातियों को निर्धारित करने के लिए भी अनुक्रमित किया जा सकता है।

एहतियात

1. यह किट m.orale, m.arginini, m.bovis, m.mermentans, m.gallisepticum, m.hominis, m.pirum, ureaplasma एसपीपी, एम। Yhirum, m.pneumonia, a.laidlawii, आदि का पता लगा सकता है । Mycoplasma की कम से कम 11 प्रजातियां दूषित हैं।

2. पूरी तरह से पिघलने से पहले बर्फ पर सभी अभिकर्मकों को मिलाएं, और उपयोग के बाद -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।

3. प्रत्येक प्रयोग के लिए एक नकारात्मक नियंत्रण और सकारात्मक नियंत्रण निर्धारित किया जाना चाहिए। प्रयोगात्मक समूह नमूना टेम्पलेट ढाल स्थापित करने की सिफारिश करता है।

4. ऑपरेशन के दौरान आपको एक मुखौटा पहनना चाहिए और प्रयोगात्मक परिणामों को प्रभावित करने से बाहरी प्रदूषण की शुरूआत को रोकने के लिए पीसीआर परिचालन मानकों का सख्ती से पालन करना होगा।

5. सेल प्रयोगों की विश्वसनीयता और स्थिरता सुनिश्चित करने के लिए, नियमित माइकोप्लाज्मा प्रदूषण परीक्षण करने की सिफारिश की जाती है।

6. आपकी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के लिए प्रयोगशाला कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

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