सेल संस्कृति के लिए mycoplasma पहचान किट Chemiluminescence विधि

G1901-20T

परिचय:

यह mycoplasma परीक्षण किट mycoplasma में एक अद्वितीय एंजाइम की गतिविधि का उपयोग कर डिजाइन किया गया है। यह एंजाइम एडीपी को एटीपी में परिवर्तित करते समय माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन अभिकर्मक में अद्वितीय सब्सट्रेट को विघटित कर सकता है। ल्यूसिफेरस एटीपी की उपस्थिति में ल्यूसिफेरिन के ऑक्सीकरण को उत्प्रेरित करता है और बायोल्यूमाइन्सेंस उत्सर्जित करता है, जिसे एक ल्यूमिनोमीटर द्वारा मापा जा सकता है ताकि नमूना में mycoplasma प्रदूषण की उपस्थिति को प्रतिबिंबित किया जा सके। संपूर्ण पहचान प्रक्रिया संचालित करने के लिए सरल है, केवल दो चरणों, और लगभग 15 मिनट लगते हैं। इस विधि में उच्च संवेदनशीलता है और वास्तविक जैविक गतिविधि के साथ माइकोप्लाज्मा का पता लगाता है, इसलिए डिटेक्शन परिणाम पीसीआर विधि से अधिक सटीक है।

भंडारण और परिवहन

गीले बर्फ के साथ परिवहन; -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें, और अंधेरे में mycoplasma पहचान अभिकर्मक स्टोर; वैधता अवधि 12 महीने है।

कदम

1. फ्लोटिंग कोशिकाओं या मलबे की एक छोटी राशि को हटाने के लिए 3-6 दिनों के लिए सेल सतह पर तैरनेवाला कोशिका सतह पर तैरनेवाला को 400 ग्राम पर अपकेंद्रित्र करने के लिए उपयुक्त राशि (1 मिलीलीटर पर्याप्त है) लें। तत्काल पहचान के लिए सतह पर तैरनेवाला लें, या एक सप्ताह के भीतर जांच के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें, या एक वर्ष के भीतर परीक्षण के लिए या 80 ℃;

2. कमरे के तापमान पर सभी परीक्षण अभिकर्मकों और परीक्षण नमूने को समेकित करें, सबसे उपयुक्त तापमान 20-25 ℃ है;

3. 96 अच्छी तरह से परीक्षण प्लेट (गैर-पारदर्शी प्लेट, एक विशेष 96-अच्छी तरह से सफेद बोर्ड की सिफारिश की जाती है) का परीक्षण करने के लिए नमूना के 50 μl और नकारात्मक नियंत्रण (जैसे बाँझ पानी या पीबीएस) जोड़ें;

4. माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन अभिकर्मक ए के 50 μL जोड़ें, हवा के बुलबुले से बचने के लिए धीरे-धीरे मिलाएं, और कमरे के तापमान (20-25 डिग्री सेल्सियस) पर 5 मिनट के लिए अंधेरे में स्टोर करें। फिर Chemiluminescence पहचान के साथ Chemiluminescence पहचान के साथ एक माइक्रोप्रेट रीडर का उपयोग करें, और मीटर ए के रूप में पढ़ता है (कृपया उपकरण की संवेदनशीलता के अनुसार उचित पैरामीटर समायोजित करें, प्रत्येक छेद का पता लगाने का समय आमतौर पर 0.25-1 s होता है);

5. माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन अभिकर्मक बी के 50 μl जोड़ें, हवा के बुलबुले से बचने के लिए धीरे-धीरे मिलाएं, और कमरे के तापमान (20-25 डिग्री सेल्सियस) पर 10 मिनट के लिए अंधेरे में स्टोर करें। फिर Chemiluminescence पता लगाने के लिए Chemiluminescence पहचान के साथ एक माइक्रोप्रेट रीडर का उपयोग करें, और मीटर बी के रूप में पढ़ता है (नोट: कृपया mycoplasma पहचान अभिकर्मक बी जोड़ने के बाद परीक्षण 10 मिनट का सख्ती से पालन करें, और इसे उन्नत या देरी नहीं होनी चाहिए, अन्यथा यह प्रभावित होगा परिणाम निर्णय);

6. अनुपात की गणना (अनुपात) = रीडिंग वैल्यू बी / रीडिंग वैल्यू ए।

ए। यदि बी / ए> 1.1, इसका मतलब है कि सेल संस्कृति में mycoplasma प्रदूषण है;

बी। यदि बी / ए <0.9, इसका मतलब है कि सेल संस्कृति में कोई mycoplasma प्रदूषण नहीं है;

सी। यदि बी / ए अनुपात 0.9-1.1 के बीच है, तो 24-48 घंटे के लिए कोशिकाओं को संस्कृति जारी रखने की सिफारिश की जाती है, और फिर यह निर्धारित करने के लिए फिर से परीक्षण करें कि माइकोप्लाज्मा प्रदूषण है या नहीं। यदि बी / ए अनुपात अभी भी 0.9-1.1 के बीच है, तो सेल संस्कृति माइकोप्लाज्मा प्रदूषण से मुक्त है और यह mycoplasma नकारात्मक है।

एहतियात

1. माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन अभिकर्मक ए में ल्यूसिफेरस होता है, जो धीरे-धीरे बार-बार ठंड और पिघलने से निष्क्रिय हो जाएगा। यह अनुशंसा की जाती है कि पहले छिद्रण के बाद अलगाव ठीक से संग्रहीत किया जाना चाहिए, और अलगाव कंटेनर स्वच्छ और प्रदूषण मुक्त होना चाहिए।

2. परीक्षण के लिए एक सफेद या काले अपारदर्शी 96-अच्छी प्लेट का उपयोग करने की दृढ़ता से अनुशंसा की जाती है। एक साधारण पारदर्शी 96-अच्छी प्लेट का उपयोग आसन्न परीक्षण कुओं के साथ हस्तक्षेप का कारण बन जाएगा।

3. मानव त्वचा की सतह एटीपी में समृद्ध है। परीक्षण करते समय कृपया प्रयोगात्मक दस्ताने और मास्क पहनें। बाहरी स्रोतों से एटीपी प्रदूषण की शुरूआत को रोकने के लिए अन्य उपभोग्य सामग्रियों को भी साफ और प्रदूषण मुक्त होना चाहिए।

4. आपकी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के लिए प्रयोगशाला कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।