Cy3-Tyramide Tyramide संकेत प्रवर्धन immunofluorescence अभिकर्मक

Cy3-Tyramide

बिल्ली सं। G1223-50μL

पैकेज सामग्री:

उत्पाद का परिचय:

यह उत्पाद Cy3-Tyramide, एक सी 3 लेबल वाला टायरामाइड है, जिसका उपयोग टायरामाइड सिग्नल एम्पलीफिकेशन टेक्नोलॉजी (टीएसए, टायरामाइड सिग्नल एम्पलीफिकेशन) के लिए किया जाता है, इसके बाद टीएसए टेक्नोलॉजी के रूप में जाना जाता है। टीएसए प्रौद्योगिकी का मुख्य सिद्धांत टायरामाइड की पेरोक्साइडस प्रतिक्रिया का उपयोग करना है (यानी, फ्लोरोसेंटली लेबल वाला टायरामाइड नमक एच 2 ओ 2 द्वारा उत्प्रेरित एचआरपी के तहत एक सहसंयोजक बॉन्ड बाध्यकारी साइट) को बड़ी संख्या में एंजाइमेटिक प्रतिक्रियाओं का उत्पादन करने के लिए है। यह उत्पाद आस-पास के प्रोटीन अवशेषों (ट्राइपोफान, हिस्टिडाइन, और टायरोसिन अवशेषों सहित) के साथ इंटरैक्ट कर सकता है) सिग्नल प्रवर्धन प्राप्त करने के लिए एंटीजन-एंटीबॉडी बाइंडिंग साइट पर फ्लोरोसिसिन बयान की एक बड़ी मात्रा बनाने के लिए गठबंधन कर सकता है। आप कई बार immunolabeling दोहराकर कई फ्लोरोसेंट धुंधला प्राप्त करने के लिए विभिन्न फ्लोरोसेंट tyramines का भी उपयोग कर सकते हैं।

श्रृंखला उत्पादों के फ्लोरोसेंस स्पेक्ट्रम डेटा निम्नानुसार हैं:

जमा करने की स्थिति:

आइस पैक परिवहन, -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर, वैध अवधि 12 महीने है।

निर्देश

एक उदाहरण के रूप में ऊतक स्लाइस लेना, निम्नलिखित प्रयोगात्मक चरणों में पानी शुद्ध पानी है, और शामिल अभिकर्मक सेवाबियो संबंधित उत्पादों को संदर्भित करते हैं:

1. पानी के लिए ऊतक खंड deparaffinize;

2. एंटीजन पुनर्प्राप्ति: प्राथमिक एंटीबॉडी के अनुसार और नमूना के प्रकार के अनुसार, ऊतक खंड पर एंटीजन पुनर्प्राप्ति करने के लिए एक उपयुक्त विधि का उपयोग करें। 1 × पीबीएस (जी 4202 या जी 0002 की सिफारिश की जाती है) हर बार 3 बार, 5 मिनट धो लें;

3. ऊतक को सर्कल करने और चिह्नित करने के लिए एक पाप कलम का उपयोग करें;

4. (वैकल्पिक) ऊतक ऑटोफ्लोरेसेंस क्वेंचर (अनुशंसित जी 1221 ए समाधान) को ऊतक में जोड़ें, कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए सेते हैं, और 5 मिनट के लिए धो लें;

5. निष्क्रियता अंतर्जात पेरोक्साइडस: ऊतक को ढंकने के लिए सेक्शन में 3% एच 2 ओ 2 जोड़ें, और गैर-विशिष्ट पृष्ठभूमि धुंध को कम करने के लिए एंडोजेनस पेरोक्साइडस को अवरुद्ध करने के लिए 25 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर अंधेरे में सेते हैं। 1 × पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

6. ब्लॉक: स्लाइड के बाद थोड़ा सूखने के बाद, 3% बीएसए या सीरम को 30 मिनट के लिए सील करने के लिए ड्रॉपवाइड जोड़ा जाता है। यदि प्राथमिक एंटीबॉडी बकरी की उत्पत्ति का है, तो 10% गधा सीरम के साथ ब्लॉक करें, और अन्य स्रोतों के लिए 3% बीएसए के साथ ब्लॉक;

7. प्राथमिक एंटीबॉडी सेते हैं: प्राथमिक एंटीबॉडी को 1 × पीबीएस या अवरुद्ध समाधान (जी 2010 की सिफारिश की गई) के साथ उचित एकाग्रता में पतला करें। धीरे-धीरे खंड पर अवरुद्ध समाधान को हिलाएं, ऊतक को ढंकने के लिए पतला प्राथमिक एंटीबॉडी ड्रॉपवाइज जोड़ें, और सेक्शन फ्लैट को पानी के साथ एक आर्द्र कक्ष बॉक्स में रखें और रात भर 4 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं। 1 × पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

8. एचआरपी-लेबलेड माध्यमिक एंटीबॉडी सेते हैं: द्वितीयक एंटीबॉडी को 1 × पीबीएस या अवरुद्ध समाधान (जी 2010 की सिफारिश की गई) के साथ उचित एकाग्रता में पतला करें, ऊतक को द्वितीयक एंटीबॉडी ड्रॉपवाइज जोड़ें, और कमरे के तापमान पर 50 मिनट के लिए सेते हैं। 1 × पीबीएस के साथ 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 5 मिनट;

9. टीएसए धुंधला काम समाधान तैयार करने के लिए टीबीएसटी (टीबीएसटी के साथ Cy3-Tyramide 1: 500 पतला करें (0.03 ‰, w / v की अंतिम एकाग्रता के लिए एच 2 ओ 2 जोड़ें)। प्रत्येक नमूने के लिए धुंधला काम समाधान के 100 μl जोड़ें, और अंधेरे में कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए सेते हैं। 1 × पीबीएस 3 बार, प्रत्येक बार 5 मिनट के साथ धोएं; (नोट: टीएसए धुंधला काम समाधान को वर्तमान उपयोग के लिए तैयार करने की सिफारिश की जाती है, और इसे 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत करने और प्रकाश से संरक्षित करने की आवश्यकता होती है। यह 24h के भीतर प्रभावी है)

10. माइक्रोवेव उपचार: ऊतक अनुभाग को एंटीजन पुनर्प्राप्ति समाधान से भरा एक मरम्मत बॉक्स में रखा जाता है (बाध्य प्राथमिक और माध्यमिक एंटीबॉडी को हटाने के लिए माइक्रोवेव हीटिंग उपचार के लिए उपयुक्त एंटीजन पुनर्प्राप्ति समाधान का चयन करें)। इस चरण में, अत्यधिक तरल वाष्पीकरण के कारण सूखे फ्लेक्स को रोकने के लिए आवश्यक है।

(नोट: यदि आपको डबल या एकाधिक फ्लोरोसेंट धुंधला करने की आवश्यकता है, तो इस चरण के अनुसार आगे बढ़ें। यदि आपको डबल या एकाधिक फ्लोरोसेंट धुंधला करने की आवश्यकता नहीं है, तो इस चरण को छोड़ दें और चरण 12 पर जाएं)

11. चरण 7-10 दोहराएं, प्राथमिक एंटीबॉडी और माध्यमिक एंटीबॉडी को हटाने के लिए दूसरी प्राथमिक एंटीबॉडी, माध्यमिक एंटीबॉडी, और टीएसए लेबल, और माइक्रोवेव उपचार सेते हैं।

12. डीएपीआई के साथ न्यूक्लियस काउंटिंग: अनुभागों को थोड़ा सूखने के बाद, ऊतक को डीएपीआई धुंधला समाधान (जी 1012 अनुशंसित) जोड़ें, और अंधेरे में कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए सेते हैं। हर बार 1 × पीबीएस, 5min के साथ 3 बार धो लें।

13. (वैकल्पिक) ऊतक ऑटोफ्लोरेसेंस क्वेंचिंग: ऑटोफ्लोरेसेंस क्वेंचर (जी 1221 बी समाधान अनुशंसित) ऊतक को ड्रॉपवाइड जोड़ें, कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए सेते हैं, और 3 मिनट के लिए चलने वाले पानी के साथ कुल्लाएं।

14. बढ़ते और सूक्ष्म परीक्षा: अनुभागों को थोड़ा सूखने के बाद, एंटी-फ्लोरोसेंस क्वेंचिंग माउंटिंग टैबलेट जोड़ें (जी 1401 की सिफारिश की गई है)। छवियों का निरीक्षण और एकत्र करने के लिए उपयुक्त फ्लोरोसेंस चैनल का चयन करें। स्लाइस को प्रकाश-सबूत स्लाइड बॉक्स में 15 डिग्री सेल्सियस पर 15 दिनों के लिए संग्रहीत किया जा सकता है।

एहतियात

1. उत्पाद के कमरे के तापमान पर पिघलने के बाद, छोटे सेंट्रीफ्यूजेशन के लिए अपकेंद्रित्र का उपयोग करें, और उड़ाने और मिश्रण के बाद एक स्वच्छ चूषण टिप का उपयोग करें।

2. फ्लोरोसेंट माध्यमिक एंटीबॉडी की तुलना में, टीएसए किट में उच्च संवेदनशीलता और मजबूत संकेत है। इसलिए, प्राथमिक एंटीबॉडी की एकाग्रता को गैर-विशिष्ट बाध्यकारी के कारण होने वाली पृष्ठभूमि फ्लोरोसेंस को कम करने के लिए एंटीबॉडी मैनुअल में अनुशंसित कमजोर अनुपात के आधार पर आमतौर पर 5-10 गुना कम हो जाना चाहिए। सर्वोत्तम प्रभाव प्राप्त करने के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी की ढाल एकाग्रता निर्धारित करने की अनुशंसा की जाती है।

3. यदि पृष्ठभूमि फ्लोरोसेंस मजबूत है, तो ऊतक ऑटोफ्लोरेसेंस क्वेंचिंग चरण जोड़ने की सिफारिश की जाती है।

4. फ्लोरोसेंट टायरामाइड का अनुशंसित कमजोर अनुपात 1: 500 है, और प्रयोगात्मक परिणामों के अनुसार कमजोर अनुपात को समायोजित किया जा सकता है (अनुशंसित कमजोर अनुपात सीमा 1: 200-1: 1000) है।

5. एकाधिक फ्लोरोसेंट लेबलिंग के लिए, पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी को पहले से जोड़ने की सिफारिश की जाती है, फिर मोनोक्लोनल एंटीबॉडी सेते हैं; पहले कम-बहुतायत लक्ष्य प्रोटीन के अनुरूप एंटीबॉडी सेते हैं, और फिर उच्च बहुतायत लक्ष्य प्रोटीन के अनुरूप एंटीबॉडी सेते हैं।

6. ऑपरेशन के दौरान कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।