G3409-5000U Recombinant Tev Protease His- टैग

पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ एक प्रोटीन है जो एस्चेरीचिया कोलाई में अपने टैग के साथ तंबाकू ईच वायरस (टीईवी) की सिस्टीन प्रोटीज़ को व्यक्त करता है। टीईवी प्रोटीज़ एक सामान्य रूप से उपयोग की जाने वाली सिस्टीन प्रोटीज़ है, जो विशेष रूप से हेप्टोपैप्टाइड अनुक्रम ग्लू-एएसएन-लियू-टायर-पीएचई-जीएलएन-जीएलवाई / एसईआर (एनलीफक्यूजी / एस) को पहचान सकता है, और जीएलएन (क्यू) और जीएलवाई / एसईआर के बीच एंजाइम पाचन निष्पादित कर सकता है (जी / एस) एमिनो एसिड अवशेष। पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ का इष्टतम पाचन तापमान 30 ℃ है, और पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ की एंजाइमेटिक गतिविधि 2 9-34 ℃ की सीमा में उच्च है। हालांकि, जब तापमान 37 ℃ तक पहुंचता है या उससे अधिक होता है, तो पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ की एंजाइमेटिक गतिविधि तेजी से घट जाती है। वास्तविक ऑपरेशन में, लक्ष्य प्रोटीन की संरचना और जैविक गतिविधि को जितना संभव हो सके संरक्षित करने के लिए, 4 ℃ पर रातोंरात टीईवी प्रोटीज़ एंजाइम पाचन का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है। पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ 6.0 से 9.0 की पीएच रेंज में सक्रिय है, लेकिन पीएच की तुलना में पीएच कम या उसके बराबर होने पर अपनी एंजाइम गतिविधि खो देता है। 400 मिमी iMidazole में अभी भी उच्च गतिविधि है। इसलिए, लक्षित प्रोटीन के शुद्धिकरण के लिए निकेल कॉलम द्वारा अपना लेबल युक्त, टीईवी प्रोटीज़ को सीधे शुद्ध लक्ष्य प्रोटीन समाधान में जोड़ा जा सकता है जिसमें iMidazole की उच्च सांद्रता होती है। 4 ℃ पर, iMidazole को डायलिसिस द्वारा हटा दिया जाता है और एंजाइम पाचन एक ही समय में किया जाता है। डायलिसिस के बाद टीईवी प्रोटीज़ के साथ एंजाइमेटिक पाचन द्वारा अपने लेबल को हटाना भी संभव है। एंजाइम पाचन के बाद लक्ष्य प्रोटीन समाधान में अपने टैग के साथ टीईवी प्रोटीज़ और एक्साइज्ड उनके टैग को निकल कॉलम के साथ बाध्य करके हटाया जा सकता है।

आवेदन:इसका प्रयोग अक्सर संलयन प्रोटीन से एमबीपी, जीएसटी, उसके या अन्य टैग किए गए प्रोटीन को हटाने के लिए किया जाता है। टीईवी प्रोटीज़ का अपना लेबल है और निकल कॉलम से बांध सकता है।

स्रोत:तंबाकू ईच वायरस (टीईवी) सिस्टीन प्रोटीज़, एस्चेरीचिया कोलाई की पुनः संयोजक अभिव्यक्ति, जिसमें उनके लेबल शामिल हैं।

एंजाइम गतिविधि परिभाषा:30 ℃, पीएच 8.0, सब्सट्रेट के 3μg (पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ क्लेवाज साइट युक्त) को आवश्यक एंजाइम गतिविधि इकाई के 85% से अधिक के भीतर cleaved किया जा सकता है।

निष्क्रियता या अवरोध:पीएमएसएफ, एईबीएसएफ, बेस्टेटिन, पेप्स्टैटिन और ईडीटीए जैसे आम सीरिन प्रोटीज़ इनहिबिटर टीईवी प्रोटीज़ गतिविधि को रोक नहीं देते हैं। पीईएम या आईएए जैसे सिस्टीन अवशेषों को लक्षित करने वाले प्रोटीज़ इनहिबिटर, टीईवी प्रोटीज़ की गतिविधि को काफी हद तक रोक सकते हैं। टीईवी प्रोटीज़ अभी भी iMidazole की उच्च एकाग्रता में उच्च एंजाइम गतिविधि को बनाए रखता है।

शुद्धता और एकाग्रता:एसडीएस-पेज टेस्ट शुद्धता ≥95%, 10 यू / μl।

पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ भंडारण समाधान:50 मिमी ट्राइस-एचसीएल, 250 मिमी एनएसीएल, 1 मिमी ईडीटीए, 5 मिमी डीटीटी, 50% (वी / वी) ग्लिसरॉल, पीएच 8.0।

10 × टीईवी बफर:500 एमएम ट्राइस-एचसीएल, 500 मिमी एनएसीएल, 5 मिमी ईडीटीए, 10 मिमी डीटीटी, पीएच 8.0।