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G3409-5000U Recombinant Tev Protease His- टैग

विशिष्टता:5000ul
उपयोग:संलयन प्रोटीन से एमबीपी, जीएसटी, उसके या अन्य टैग किए गए प्रोटीन को हटा दें।
भंडारण और परिवहन:गीले बर्फ के साथ परिवहन; -20 पर स्टोर12 महीने के लिए मान्य।
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उपलब्धता स्थिति:
  • G3409-5000U
  • Servicebio

उत्पाद वर्णन

अवलोकन

पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ एक प्रोटीन है जो एस्चेरीचिया कोलाई में अपने टैग के साथ तंबाकू ईच वायरस (टीईवी) की सिस्टीन प्रोटीज़ को व्यक्त करता है। टीईवी प्रोटीज़ एक सामान्य रूप से उपयोग की जाने वाली सिस्टीन प्रोटीज़ है, जो विशेष रूप से हेप्टोपैप्टाइड अनुक्रम ग्लू-एएसएन-लियू-टायर-पीएचई-जीएलएन-जीएलवाई / एसईआर (एनलीफक्यूजी / एस) को पहचान सकता है, और जीएलएन (क्यू) और जीएलवाई / एसईआर के बीच एंजाइम पाचन निष्पादित कर सकता है (जी / एस) एमिनो एसिड अवशेष। पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ का इष्टतम पाचन तापमान 30 ℃ है, और पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ की एंजाइमेटिक गतिविधि 2 9-34 ℃ की सीमा में उच्च है। हालांकि, जब तापमान 37 ℃ तक पहुंचता है या उससे अधिक होता है, तो पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ की एंजाइमेटिक गतिविधि तेजी से घट जाती है। वास्तविक ऑपरेशन में, लक्ष्य प्रोटीन की संरचना और जैविक गतिविधि को जितना संभव हो सके संरक्षित करने के लिए, 4 ℃ पर रातोंरात टीईवी प्रोटीज़ एंजाइम पाचन का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है। पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ 6.0 से 9.0 की पीएच रेंज में सक्रिय है, लेकिन पीएच की तुलना में पीएच कम या उसके बराबर होने पर अपनी एंजाइम गतिविधि खो देता है। 400 मिमी iMidazole में अभी भी उच्च गतिविधि है। इसलिए, लक्षित प्रोटीन के शुद्धिकरण के लिए निकेल कॉलम द्वारा अपना लेबल युक्त, टीईवी प्रोटीज़ को सीधे शुद्ध लक्ष्य प्रोटीन समाधान में जोड़ा जा सकता है जिसमें iMidazole की उच्च सांद्रता होती है। 4 ℃ पर, iMidazole को डायलिसिस द्वारा हटा दिया जाता है और एंजाइम पाचन एक ही समय में किया जाता है। डायलिसिस के बाद टीईवी प्रोटीज़ के साथ एंजाइमेटिक पाचन द्वारा अपने लेबल को हटाना भी संभव है। एंजाइम पाचन के बाद लक्ष्य प्रोटीन समाधान में अपने टैग के साथ टीईवी प्रोटीज़ और एक्साइज्ड उनके टैग को निकल कॉलम के साथ बाध्य करके हटाया जा सकता है।

आवेदन:इसका प्रयोग अक्सर संलयन प्रोटीन से एमबीपी, जीएसटी, उसके या अन्य टैग किए गए प्रोटीन को हटाने के लिए किया जाता है। टीईवी प्रोटीज़ का अपना लेबल है और निकल कॉलम से बांध सकता है।

स्रोत:तंबाकू ईच वायरस (टीईवी) सिस्टीन प्रोटीज़, एस्चेरीचिया कोलाई की पुनः संयोजक अभिव्यक्ति, जिसमें उनके लेबल शामिल हैं।

एंजाइम गतिविधि परिभाषा:30 ℃, पीएच 8.0, सब्सट्रेट के 3μg (पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ क्लेवाज साइट युक्त) को आवश्यक एंजाइम गतिविधि इकाई के 85% से अधिक के भीतर cleaved किया जा सकता है।

निष्क्रियता या अवरोध:पीएमएसएफ, एईबीएसएफ, बेस्टेटिन, पेप्स्टैटिन और ईडीटीए जैसे आम सीरिन प्रोटीज़ इनहिबिटर टीईवी प्रोटीज़ गतिविधि को रोक नहीं देते हैं। पीईएम या आईएए जैसे सिस्टीन अवशेषों को लक्षित करने वाले प्रोटीज़ इनहिबिटर, टीईवी प्रोटीज़ की गतिविधि को काफी हद तक रोक सकते हैं। टीईवी प्रोटीज़ अभी भी iMidazole की उच्च एकाग्रता में उच्च एंजाइम गतिविधि को बनाए रखता है।

शुद्धता और एकाग्रता:एसडीएस-पेज टेस्ट शुद्धता ≥95%, 10 यू / μl।

पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ भंडारण समाधान:50 मिमी ट्राइस-एचसीएल, 250 मिमी एनएसीएल, 1 मिमी ईडीटीए, 5 मिमी डीटीटी, 50% (वी / वी) ग्लिसरॉल, पीएच 8.0।

10 × टीईवी बफर:500 एमएम ट्राइस-एचसीएल, 500 मिमी एनएसीएल, 5 मिमी ईडीटीए, 10 मिमी डीटीटी, पीएच 8.0।


घटक संख्या

अवयव

G3409-5000U

G3409-1

पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ (उसका टैग) (10 यू / μl)

500 μl

G3409-2

10 × टीईवी बफर

3 × 1 मिलीलीटर

G3409-3

नियंत्रण प्रोटीन

100 μl

उत्पाद उपयोग


1. संयम पाचन प्रणाली की सिफारिश

अवयव

आयतन

10 × टीईवी बफर

5 μl

ब्याज प्रोटीन

30 μg

पुनः संयोजक टीईवी प्रोटीज़ (उसका टैग) (10 यू / μl)

1 μl

डीडीएच2O

50 μl के लिए

2. प्रतिक्रिया प्रणाली को 1-4h के लिए 30 ℃ पर रखा गया था। यदि लक्ष्य प्रोटीन 30 ℃ पर स्थिर नहीं है, तो प्रतिक्रिया प्रणाली को एंजाइमेटिक पाचन (लगभग 16h) के लिए रातोंरात 4 ℃ पर रखा जा सकता है।

3. पाचन खुराक और प्रतिक्रिया स्थितियों का मूल्यांकन करने के लिए पाचन उत्पाद के 10μL नमूने पर एसडीएस-पेज परख किया गया था


टिप्पणियाँ


1. एंजाइम उत्पादों को एक बर्फ बॉक्स या बर्फ स्नान में रखा जाना चाहिए, और उपयोग के तुरंत बाद -20 ℃ पर संग्रहीत किया जाना चाहिए। अलग भंडारण की सिफारिश की जाती है।

2. आपकी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया एक प्रयोगशाला कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनने के लिए पहनें।


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