Swescript आरटी I पहली स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण किट

उत्पाद का परिचय:

यह उत्पाद कुल आरएनए या एमआरएनए के साथ कुल आरएनए या एमआरएनए के साथ कुशल रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए टेम्पलेट के रूप में सीडीएनए के पहले स्ट्रैंड को संश्लेषित करने के लिए संशोधित उत्परिवर्ती रिवर्स ट्रांसक्रिप्टेस का उपयोग करता है। किट में उच्च गुणवत्ता वाले सीडीएनए के पहले स्ट्रैंड को संश्लेषित करने के लिए आवश्यक सभी अभिकर्मकों को शामिल किया गया है, और पसंद के लिए दो प्रकार के सीडीएनए संश्लेषण प्राइमर्स प्रदान करता है: यादृच्छिक हेक्सामर प्राइमर और ओलिगो (डीटी) 18 प्राइमर संश्लेषित सिंगल-स्ट्रैंडेड सीडीएनए उत्पाद जो सीधे हो सकते हैं बाद के पीसीआर या क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए उपयोग किया जाता है। Swescript आरटी I (रिवर्स ट्रांसक्रिप्टेस) एम-एमएलवी रिवर्स ट्रांसक्रिप्टेज के आधार पर एक उत्परिवर्ती रिवर्स ट्रांसक्रिप्टस है और इन विट्रो विकासवादी स्क्रीनिंग के माध्यम से प्राप्त किया गया है। SWEScript आरटी मेरे पास कोई rnase h गतिविधि नहीं है। पहले स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण प्रतिक्रिया के दौरान डीएनए / आरएनए हाइब्रिडाइजेशन के टेम्पलेट में आरएनए गिरावट से बचा गया था, ताकि पहले स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण की राशि और लंबाई सुनिश्चित हो सके। जंगली प्रकार के एंजाइम की तुलना में, एसडब्ल्यूईएसक्रिप्ट आरटी की थर्मल स्थिरता और संश्लेषण दक्षता में काफी सुधार हुआ है, और सीडीएनए को 42-55 ℃ रेंज के साथ-साथ सीडीएनए को 10 केबी तक कुशलता से संश्लेषित किया जा सकता है।

पैकेज सामग्री:

अवयव:

^a: Rnase अवरोधक के साथ

^b: DNTP मिश्रण के साथ & mg² +

गोदाम की स्थिति:

गीले आइस बैग परिवहन; -20 ℃ तापमान पर संग्रहीत, 12 महीने के लिए मान्य।

उपयोग:

सीडीएनए संश्लेषण के लिए पहला कदम

1. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन रिएक्शन सिस्टम की तैयारी (अनुशंसित 20ul प्रतिक्रिया प्रणाली)

नोट: उच्च जीसी या जटिल टेम्पलेट्स के लिए, आरएनए टेम्पलेट, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-प्राइमर्स और नुनेरेज-फ्री पानी को पहले से मिश्रित किया जा सकता है और फिर 5 मिनट के लिए 65 ℃ पर रखे जाने के बाद जल्दी बर्फ पर ठंडा किया जा सकता है। और फिर आप अन्य प्रतिक्रिया घटकों को जोड़ते हैं।

2. धीरे-धीरे मिश्रण और अपकेंद्रित्र;

3. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रोग्राम सेटिंग:

ए: उदाहरण के लिए, यादृच्छिक हेक्सामर प्राइमर का चयन किया जाता है और 5 मिनट के लिए 25 ℃ पर ऊष्मायन किया जाता है, फिर बाद की प्रतिक्रिया की जाती है। यदि आप ओलिगो (डीटी) 18 प्राइमर या जीन विशिष्ट प्राइमर का उपयोग करना चुनते हैं, तो आप सीधे 50 ℃ पर प्रतिक्रिया कर सकते हैं;

बी: उच्च जीसी या जटिल टेम्पलेट्स के लिए, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन तापमान 55 ℃ तक बढ़ाया जा सकता है।

टिप्पणियाँ:

1. आरएनएएस प्रदूषण से बचने के लिए कृपया ऑपरेशन के दौरान डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

2. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन उत्पादों को थोड़े समय के लिए -20 ℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है। यदि दीर्घकालिक भंडारण की आवश्यकता है, तो बार-बार फ्रीज-थॉ चक्रों से बचने के लिए पैकिंग के बाद उन्हें -80 ℃ पर स्टोर करने की सिफारिश की जाती है।

3. यदि टेम्पलेट यूकेरियोटिक मूल का है, तो ओलिगो (डीटी) 18 प्राइमर का चयन करने की सिफारिश की जाती है और पूर्ण-लंबाई सीडीएनए की उच्चतम उपज प्राप्त करने के लिए यूकेरियोटिक एमआरएनए की 3 'पॉली ए पूंछ के साथ इसे जोड़ती है।

4. प्रोकार्योटिक आरएनए के रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए, यादृच्छिक हेक्सामर प्राइमर या जीन विशिष्ट प्राइमर का उपयोग किया जाना चाहिए।

5. यादृच्छिक हेक्सामर प्राइमर में व्यापक प्रयोज्यता है और एमआरएनए, आरआरएनए, टीआरएनए, छोटे आरएनए और एलएनसीआरएनए टेम्पलेट्स के लिए उपयुक्त है।

6. यदि रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के बाद क्यूपीसीआर परख, ओलिगो (डीटी) 18 प्राइमर और यादृच्छिक हेक्सामर प्राइमर को एमआरएनए के सभी क्षेत्रों में सीडीएनए संश्लेषण दक्षता बनाने के लिए मिश्रित किया जा सकता है, जो मात्रात्मक परिणामों की प्रामाणिकता और पुनरावृत्ति को बेहतर बनाने में मदद करता है।